A terapia fotodinâmica (TFD) é baseada na produção de espécies oxidativas por um fotossensibilizador, que é uma molécula capaz de converter energia luminosa específica em potencial químico. O estresse oxidativo gerado por esta terapia pode induzir a morte celular imunogênica (MCI) e desencadear uma resposta imunológica. Esse tipo de morte gera diferentes padrões moleculares associados a danos (DAMPs) para o sistema imunológico, que podem resultar na ativação das células dendríticas, especializadas na apresentação de antígenos. Portanto, a TFD surge como uma alternativa para o tratamento do câncer, uma vez que desempenha um papel importante na ativação do sistema imunológico e consiste em um tratamento local não invasivo.No entanto, o uso dessa terapia ainda enfrenta algumas limitações, como baixa fotossensibilidade de longo prazo e baixa biodisponibilidade dos fotossensibilizadores. Para promover maior eficácia terapêutica e ativação do sistema imunológico, o grupo de trabalho atual desenvolveu um novo sistema de fotossensibilizador de terceira geração composto por alumínio cloro ftalocianina associada a nanopartículas lipídicas sólidas baseadas em manteiga amazônica (ALPcNLS). Foram realizados experimentos para avaliar seu potencial terapêutico, com o objetivo de verificar se o protocolo estabelecido pode induzir a morte celular imunogênica e a ativação das células dendríticas (CDs). Nos ensaios in vitro, foi utilizado a linhagem celular de melanoma B16-F10 e células dendríticas precursoras da medula óssea de camundongos C57BL/6. Para o tratamento, as células de melanoma foram expostas ao nanocarregador por 15 minutos, mantidas no escuro ou irradiadas por 10 minutos com luz LED (660 nm a uma densidade de energia de 25,88 J/cm2 ). Mitoxantrona foi utilizado como controle positivo para a morte celular imunogênica. Os ensaios de viabilidade celular mostraram que o nanocarreador desempenhou bem sua função citotóxica quando foi excitado pela luz, o que desencadeou na produção de espécies reativas de oxigênio. A imunomarcação para microscopia confocal e para microscopia eletrônica de transmissão mostraram que o tratamento induziu a produção de DAMPs. Após tratamento das células B16-F10, foi possível observar a produção e autofagossomos e de citocinas como IL-12, que desempenham um papel importante no processo de resposta imunológica. A avaliação de células dendríticas por microscopia mostraram alterações morfológicas, após o cocultivo com células tumorais tratadas. Além disso as CDs, apresentaram uma maior expressão de componentes de membrana como MHCII e CD86, bem como produção de citocinas como IL-12 e IFN- γ, que são fatores importante para a ativação do sistema imunitário. Desta forma, os resultados indicam que o protocolo estabelecido com a nanoestrutura desenvolvida tem o potencial de melhorar a eficácia da TFD, promovendo a morte celular imunogênica e induzindo alterações fenotípicas nas células dendríticas, indicativas de sua ativação.

No final de 2019 um novo coronavírus capaz de infectar humanos foi identificado: o SARS-CoV-2, que é o agente etiológico da COVID-19. O SARS-CoV-2 rapidamente se espalhou por todo o mundo causando uma pandemia mundial, com consequências sociais e econômicas desastrosas. O SARS-CoV-2 utiliza a Enzima conversora de Angiotensina 2 (ACE2) como receptor celular. A Proteína S do SARSCoV-2, formada por um trímero onde cada monômero possui cerca de 180 kDa, é responsável por mediar a ligação com o ACE2 e assim a entrada do vírus na célula. A Proteína S é composta por duas subunidades, denominadas S1 e S2. Na subunidade S1 está presente o RBD (do inglês Receptor Binding Domain) que é a parte da glicoproteína que interage diretamente com o receptor celular. Na subunidade S2 está o sítio de clivagem S2´ e imediatamente após esse sítio, está a região do Peptídeo de Fusão (FP), que juntamente com o sítio S2´ auxilia na entrada do vírus na célula hospedeira. Durante a pandemia foram desenvolvidas anticorpos monoclonais terapêuticos que tinham como alvo a proteína S do SARS-CoV-2, especialmente o RDB, com o intuito de bloquear a entrada do vírus na célula hospedeira por meio do bloqueio da interação entre a Proteína S e o receptor celular. Entretanto, variantes do SARS-CoV-2 surgiram e acumularam mutações na Proteína S e principalmente no RBD, que assim reduziram a eficácia dos anticorpos contra essa região. Neste trabalho, relatamos o desenvolvimento de dois fragmentos de anticorpos a partir de uma biblioteca combinatória em fagos, reativos com o FP do SARS-CoV-2, que diferentemente do RBD, se manteve extremamente conservada mesmo entre as variantes do SARS-CoV-2. Demonstramos a capacidade desses fragmentos de anticorpos, no formato scFv, de se ligarem a Proteína S das variantes Gama e Delta e também ao vírus original de Wuhan. Esses novos anticorpos podem agora serem testados como alternativas terapêuticas para o tratamento de infecções pelo SARSCoV-2.

A Doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa progressiva e é a causa mais frequente de demência na população mundial idosa. Considerando a alta prevalência da doença e os custos socioeconômicos da sociedade como um todo, a DA é considerada um importante problema de saúde pública. Suas causas ainda são incertas, porém muitos autores relatam a hipótese da cascata amilóide e a hipótese da proteína tau fosforilada como seu principal causador, levando a neurodegeneração, morte neuronal e demência. Atualmente, a DA conta com poucos tratamentos, e em sua maioria, sintomáticos, que não impedem ou retardam a progressão da doença, de modo que novos tratamentos são urgentes. Nesse cenário, compostos de peçonhas animais têm sido observados como uma plataforma inovadora para a descoberta de novos tratamentos, devido sua alta especificidade a alvos do Sistema Nervoso Central. Os peptídeos occidentalina e neurovespina, isolados da vespa Polybia Occidentalis demonstraram ação neuroprotetora em modelos de doenças neurodegenerativas, sendo capazes de ultrapassar a barreira hematoencefálica, e sendo capazes de inibir correntes de cálcio de canais do tipo Cav1.2, ademais, dados preliminares corroboram que a neurovespina possa inibir a via glutamatérgica, via patologicamente alterada na DA. Do peptídeo neurovespina, foi desenvolvido o peptídeo modificado octovespina, que demonstrou atividade neuroprotetora in vivo e in vitro em um modelo de doença de Alzheimer em camundongos, sendo capaz de evitar a agregação da β-Amiloide e de reverter os déficits de memória causados pela β-Amiloide. Isso posto, o octovespina pode ser um composto promissor para uso como fármaco modelo no desenvolvimento de novos tratamentos para doenças neurodegenerativas. Para tanto, foi desenvolvido um anágologo da octovespina, o neurocidentallis, do qual foi retirado um anel aromático (fenilalanina), com intuito de reduzir sua hidrofobicidade, para melhor solubilização do mesmo em meio aquoso. Contudo, um dos desafios no uso de peptídeos no contexto clínico é a entrega dos mesmos ao SNC pela via parenteral, sendo que alguns obstáculos devem ser superados, como processos de remoção de peptídeos mediante proteases endógenas (DAKWAR et al., 2012), e propriedades físico-químicas desfavoráveis dos próprios fármacos (FENG et al., 2018). Com isso, buscando facilitar a entrega do neurocidntallis ao SNC, sua biodisponibilidade, estabilidade, solubilidade e bioaderência, o neurocidentallis foi encapsulada em nanoemulsões, atuando como drug delivery systems capazes de carregar e entregar o composto no tecido cerebral. As nanopartículas utilizadas serão conjugados do peptídeo neurocidentallis + nanoemulsões (NE) de quitosana ou PEG, sendo que ambos os tipos de NE vêm sido amplamente estudados e demonstram bons perfis de segurança, tanto in vivo quanto in vitro (DE LIMA e MORTARI, 2022; ROSTAMI, 2020; YU et al., 2019; ZHAO et al., 2019). Esse projeto busca aprofundar os estudos sobre o peptídeo bioinspirado neurocidentallis na Doença de Alzheimer, por meio de ensaios comportamentais como Labirinto Aquático de Morris, Teste de Reconhecimento de Objeto novo e Open field, além de análises imunohistoquímicas, a fim de demonstrar seu potencial como ferramenta no estudo e no tratamento da doença.

A insuficiência cardíaca (IC) secundária à cardiomiopatia dilatada não isquêmica (CMDNI) lidera as indicações de transplante cardíaco (TxC) no Brasil, no entanto seu estudo concentra-se majoritariamente na cardiomiopatia dilatada idiopática (CDI). A cardiomiopatia chagásica crônica (CCC), altamente prevalente na América Latina, apresenta maior severidade e pior desfecho se comparada às outras cardiomiopatias. Uma vez que os eventos moleculares da IC que conduzem o curso clínico distinto de pacientes com CMDNI ainda são pouco compreendidos, o presente estudo caracteriza e discrimina os perfis de proteínas e metabolólitos em plasma de 15 pacientes com IC avançada submetidos ao TxC – 8 pacientes com CCC e 7 com CDI – por espectrometria de massas. Comparados aos 12 doadores de coração, incluídos para reproduzir experimentalmente as condições fisiológicas (grupo CTRL), pacientes com IC avançada exibiram maior abundância de proteínas associadas à defesa antioxidante, com destaque para o catabolismo do peróxido de hidrogênio e transporte de óxido nítrico, e um desequilíbrio metabólico global indicativo principalmente de um acúmulo de ácidos graxos, aminoácidos e componentes do ciclo de Krebs. Dentre as etiologias, 6 proteínas foram discriminantes entre pacientes com CCC e CDI, além da regulação positiva de proteínas efetoras da resposta imune pró-inflamatória e do transporte reverso de colesterol na CMDNI chagásica. As análises CCC vs. CDI revelaram ainda uma disparidade metabólica entre as condições patológicas, com 12 metabólitos de maior representatividade para a CCC e 11 para a CDI. Os distúrbios foram relacionados principalmente ao perfil de metabolismo de aminoácidos. Embora a disfunção mitocondrial possa ser um evento mecanicista central na predisposição à IC, a regulação diferencial de proteínas e o comprometimento metabólico associados diferem entre as populações de CCC e CDI, corroborando as observações clínicas quanto ao prognóstico de pacientes com doença de Chagas.

A COVID-19 (do inglês coronavírus disease 2019), é uma doença cuja forma severa é caracterizada pela Síndrome Respiratória Aguda Grave, é causada pelo novo betacoronavírus SARS-CoV-2 (do inglês Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2. Desde o relato do primeiro caso na cidade de Wuhan, província de Hubei, China, em dezembro de 2019, o SARS- CoV-2 tem se espalhado rapidamente no mundo. No dia 30 de janeiro de 2020, a Organização Mundial de Saúde (OMS) classificou a doença como uma emergência de saúde internacional e no dia 11 de março declarou haver uma pandemia, com aproximadamente 118.000 casos em 114 países e territórios (OMS,2020). A atual pandemia da COVID- 19, vem exigindo o desenvolvimento de vários produtos e serviços biotecnológicos para detecção, tratamento e prevenção de infecções e doenças causadas por esse vírus. Além das ferramentas moleculares para detecção desse vírus, como a reação em cadeia da polimerase quantitativa com transcriptase reversa (RT-qPCR), técnicas sorológicas foram desenvolvidos e têm sido bastante empregadas para avaliar a soroconversão de pacientes infectados e imunizados. Neste trabalho, utilizamos a expressão da proteína nucleocapsídeo (N) de SARS-CoV-2 em células de insetos, seguida de sua purificação por cromatografia de afinidade. O gene N foi clonado no genoma do Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) via transposição e o baculovírus recombinante resultante foi usado para infecção de células de lepidópteros (Sf9) adaptadas à suspensão de alta densidade. Usando tampão Tris-HCl pH 8,0 como fase móvel e eluindo proteínas ligadas com imidazol 175 mM como parte de um gradiente de três etapas, uma média de 1 mg de proteína N pode ser purificada de cada 50 mg de proteína total do extrato de proteínas solúveis de células de inseto infectadas. O antígeno foi testado em amostras obtidas de pacientes confirmados para COVID-19 por RT-qPCR do Hospital Regional de Santa Maria –DF e aplicado em um modelo de ELISA indireto – in house. Os resultados apresentaram índices satisfatórios para a utilização do antígeno na detecção de IgG de pacientes infectados em diferentes períodos da doença. O ELISA indireto in-house pode ser usado como ferramenta para o detecção de IgG de forma quantitativa. Nesse trabalho as análises auferidas mostraram que a proteína N, tem potencial imunogênico, e que o protótipo ELISA – inhouse, pode ser uma ferramenta utilizada no diagnóstico da COVID-19, tendo em vista os dados alcançados na análise estatística, onde apresentaram uma sensibilidade de 94,4%, especificidade de 92,1% e acurácia de 92,5% nas amostras com desconto das reações de fundo (reações inespecíficas), utilizando-se da curva ROC e com intervalo de confiança de 95% (IC95%) nos paciente que apresentaram sintomas inferiores a sete dias da infecção. As amostras com intervalo >7 a 14 dias, alcançaram a sensibilidade de 100% e a especificidade de 94,4% utilizando-se da curva ROC. Outro fator observado, indica que a análises sem o desconto das reações de fundo (reações inespecíficas) diminuem a sensibilidade de especificidade em em ambas as análises (NBS e NBF).

A transferência horizontal de genes (THG) tem um papel importante na plasticidade evolutiva dos organismos para novos ambientes e condições, podendo ser favorecida por diversas relações ecológicas, como o parasitismo. Exemplos convincentes de THG têm sido demonstrados em diferentes parasitos e hospedeiros, como é o caso do Trypanosoma cruzi. Várias metodologias são utilizadas para inferir a presença de THG entre organismos não relacionados, cada uma com seu próprio conjunto de características e limitações. Recentemente, técnicas de marcação fluorescente passaram a ser empregadas para verificar a integração e localização de genes candidatos a THG no genoma do hospedeiro. A esse respeito, vários estudos já utilizaram o sistema CRISPR/dCas9 (Cas9 desativada), ligado a GFP, para investigar a organização cromossômica e visualizar a dinâmica cromossômica e loci genômica. Embora nenhum estudo ainda tenha utilizado a técnica para detectar eventos THG, o sistema mostra-se promissor para tal, uma vez que possibilita avaliar a organização espaço-temporal dessas sequências no genoma. Neste trabalho, demonstramos a transferência gênica lateral na relação parasito-hospedeiro por metodologia CRISPR/dCas9, utilizando como modelo células infectadas pelo T. cruzi. Inicialmente, a técnica foi validada com diversos controles, o que mostrou especificidade de marcação e ausência de alvos inespecíficos. Em seguida, células HEK293 infectadas pelo parasito foram transfectadas com RNA guia (RNAg) para minicírculo de kDNA de T. cruzi após diferentes períodos de infecção. Observou-se marcação de sequências de kDNA em todos os períodos analisados. Ainda, visando demonstrar que a transferência de kDNA independe da presença do parasito, as células foram tratadas com benznidazol e analisadas após 30 dias do início da infecção. Em outro grupo experimental, as células foram colocadas em co-cultivo com o parasito utilizando sistemas transwell. Em ambas as situações, o sistema CRISPR/dCas9 demonstrou presença de minicírculo de kDNA de T. cruzi no genoma celular. A análise das amostras por PCR em tempo real (qPCR), confirmou a ausência de DNA nuclear do parasito e presença de kDNA. Os resultados obtidos demonstram que o sistema CRISPR/dCas9 foi capaz de identificar sequência de DNA proveniente de evento THG no modelo de estudo. Os achados suportam o uso da técnica como metodologia complementar na identificação e estudo de sequências transferidas horizontalmente entre diferentes organismos.

A Doença de Chagas (DC) é uma patologia parasitária causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Considerada uma doença tropical negligenciada, a DC afeta milhões de pessoas nos 21 países da América Latina em que é endêmica e nos países recipientes de imigrantes dessa região. Devido à escassez de medicamentos disponíveis para seu tratamento, há um elevado interesse em conhecer os componentes homeostásicos do tripanossomatídeo Trypanosoma cruzi, de forma a buscar possíveis alvos farmacológicos. Neste sentido, considerando a já conhecida importância das cinesinas em diversas enfermidades devido ao seu papel na regulação da citocinese e manutenção da morfologia celular, buscamos neste trabalho caracterizar a proteína motora cinesina C (TcKIN-C) de T. cruzi e sua importância na homeostase celular. Inicialmente foi feito um levantamento in sílico das características da TcKIN-CC, cinesina órfã presente somente no T. cruzi, expressa pelos alelos TcCLB.504427.260 e TcCLB.508043.40. Adicionalmente, utilizando a premissa da metagenômica, foi utilizado a ferramenta biotecnológica CRISPR/Cas9 no objetivo de provocar uma interrupção na expressão TcKIN-C, resultando na expressão truncada desta proteína e possível perda da sua funcionalidade. Através da análise in sílico, foi observado uma diferença significativa na sequência dos dois alelos, de modo que foi realizado uma análise de ambos os alelos utilizando ferramentas de bioinformática, desde alinhamentos, predição de modificações pós-traducionais (MPTs), redes de interação até a estrutura 3D de ambos os alelos. Em seguida, foi realizado um nocaute utilizando a técnica supracitado, onde foi traçado duas estratégias: um nocaute inicial (denominado Estratégia I) sem seleção para observar os efeitos a nível populacional e um segundo nocaute (denominado Estratégia II), onde a população transgênica foi selecionada e os efeitos da deleção da TcKIN-C foram estudados mais detalhadamente. Até a data desta publicação, não há publicado nenhum outro trabalho que faça a caracterização funcional de uma cinesina em Trypanosoma cruzi. Em suma, como observado no Trypanosoma brucei, este trabalho corrobora com a noção de que as cinesinas têm importância central para a sobrevivência desses parasitos. Ademais, também foi possível alcançar o objetivo de selecionar populações transgênicas, possibilitando estudos posteriores.

A malária é uma doença, na qual tem como agentes etiológicos os protozoários do gênero Plasmodium, sendo que a espécie responsável pelos casos clínicos mais graves é o P. falciparum. Em 2020, foram registrados 241 milhões de casos de malária, sendo que foram registrados, apenas na Região Africana, onde predomina a espécie P. falciparum, cerca de 95% total dos casos, dessa forma, estudar o parasita se torna necessário, principalmente pelos registros crescentes de resistência aos antimaláricos atuais. A fim de compreender melhor uma das organelas essenciais para a sobrevivência do parasita, o presente trabalho objetivou utilizar a APEX2 para marcar através da biotinilação as proteínas mitocondriais de P. falciparum. Esta metodologia, permite que através do uso do substrato (biotina-fenol) e agente oxidante (peróxido de hidrogênio), a biotinilação de proteínas de compartimentos celulares de interesse ocorra, permitindo uma análise detalhada e fidedigna do conteúdo proteômico, através do enriquecimento das proteínas biotiniladas. Após a obtenção de parasitas transfectados com o plasmídeo de expressão epissomal contendo a sequencia codificadora para APEX2 fusionada a um putativo sinal de endereçamento mitocondrial, por Western-blot e estreptavidina-blot, foi observado que tanto a expressão da HA-APEX2 e marcação por biotinilação ocorreram. No entanto, a citolocalisação da APEX2 por imunofluorescência, ocorreu de forma difusa em todo o corpo celular do parasita. Então, HA-APEX2 não foi endereçada especificamente na mitocôndria de P. falciparum. Além da mitocôndria, o P. falciparum, possui outra organela plastidial com características plant-like, denominada apicoplasto. Por alguma razão ainda desconhecida, ambas as organelas apresentam uma inter-relação bioquímica na biossíntese do grupo heme. Por esse motivo, as estratégias de predição in silico e data mining (mineração de dados) das proteínas mitocondriais e de apicoplasto, foram empregadas para compor os subproteomas preditos de ambas organelas. No total, foram preditas 708 proteínas mitocondriais, e, 781 proteínas pertencentes do apicoplasto de P. falciparum. Após uma comparação entre os datasets, observou-se uma sobreposição de 108 proteínas. Apesar de ser uma mera análise de bioinformática, este fato reforça as evidências amplamente conhecidas, acerca da biologia da mitocôndria e do apicoplasto de P. falciparum. Devido a marcação inespecífica da mitocôndria pela HA-APEX2, uma nova sequência está em fase de clonagem para posterior transfecção. O intuito principal da realização das predições de ambas as organelas, está fundamentada nas características já expostas de ambas organelas. Desse modo, um panorama detalhado acerca das características bioquímicas de ambas organelas já foi estabelecido, para auxiliar nas futuras análises proteômicas.

A infecção pelo novo Coronavírus SARS-CoV-2, responsável pela Síndrome Respiratória Aguda Grave conhecida como Covid-19,resultou em uma grande pandemia a partir de março de 2020,com mais de 670 milhões de casos confirmados e cerca de 6,8 milhões de óbitos.A doença está associada a complicações respiratórias, mas também existem estudos que já comprovaram lesões em diferentes órgãos,mostrando inclusive que alguns pacientes apresentam sequelas até anos depois.Entre as estratégias de tratamento o desenvolvimento de novos anticorpos monoclonais se ressai por sua alta afinidade, maior especificidade, segurança farmacológica ,podendo ser utilizados também em kits de diagnóstico mais eficientes.Nesse sentido o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de anticorpos específicos que se liguem ao SARS-CoV-2 com potencial de bloquear a infecção de células pelo vírus.Para isso desenvolvemos fragmentos de anticorpos denominados ScFv(Fragmento variável de cadeia única) utilizando uma biblioteca desenvolvida a partir do plasma de convalescentes,.Selecionamos em 4 rounds,utilizando dois tipos diferentes de antígenos, a subunidade de reconhecimento ao receptor hospedeiro (S1), e o domínio dessa proteína que é responsável pela ligação ao receptor (RBD). A estratégia foi imobilizar separadamente os antígenos em placas de ELISA e adicionar a biblioteca de fagos.A análise do progresso de seleção revelou que houve enriquecimento de anticorpos específicos ao antígeno viral,e 13 deles foram produzidos em altos níveis, em sistema heterólogo de células bacterianas, e purificados, por cromatografia de afinidade em coluna de Níquel.Foi demonstrado que os anticorpos recombinantes selecionados e produzidos apresentaram capacidade de ligação ao antígeno viral.Também foi mostrado que os anticorpos foram capazes de neutralizar a infecção por vírus Sars-Cov-2 in vitro. Esses dados evidenciam o potencial neutralizante dos anticorpos humanos desenvolvidos nessa pesquisa e revelam a relevância deles no desenvolvimento de metodologias eficientes e seguras de tratamento de infecções por vírus Sars-Cov-2. 

O vírus SARS-CoV-2 é o agente patológico da pandemia de COVID-19, responsável por 635 milhões de casos e 6 milhões de óbitos até novembro de 2022. Em contrapartida ao avanço da pandemia, pesquisas de medicamentos antivirais foram iniciadas com foco nas proteases virais por seu papel essencial na replicação. Entre os alvos do SARS-CoV-2, a Main protease - Mpro, é uma cisteína-protease de 33 kDa, responsável pela clivagem de 16 sítios da poliproteína e comum em diversas espécies de coronavírus, além de não possuir similaridade com quaisquer proteínas humanas. Outro alvo, a Papaína-like protease – PLpro, é uma cisteína-protease de 36 kDa responsável pela clivagem de 3 proteínas virais e 2 reguladores da ação imunológica do hospedeiro.  O presente trabalho objetivou contribuir com novos dados acerca da expressão e atividade in vitro de duas importantes proteases da família Coronaviridae, bem como avaliar sua inibição por compostos naturais. Em relação à Mpro, foram testadas diferentes formas de indução descritas na literatura com a constatação de bons resultados nas induções de 5 e 18 horas a 18°C ± 2 com posterior purificação em coluna de Ni+NTA, confirmado pela técnica de Western blot. Em relação à PLpro, as condições descritas na literatura foram testadas, convergindo para a melhor condição à 18°C por 18 horas com 0,1 mM de IPTG e 1 mM de ZnCl₂. Os testes de atividade enzimática indicaram que o armazenamento à -80°C é o mais efetivo, independente da presença de glicerol. Ainda, observou-se que dentre os tampões avaliados, tanto o tampão HEPES 10 mM pH 7,5 e DTT 5 µM, quanto o tampão Tris-HCl 50 mM pH 7,6 e DTT 5 µM proporcionaram melhor atividade enzimática. O impacto da adição de diferentes compostos foi avaliado, indicando que o uso de DTT no tampão de atividade apresentou aumento de cerca de 68% da atividade na concentração de 10 µM. Por outro lado, a adição de cloreto de zinco reduziu a atividade enzimática em até 95%. A adição de cloreto de sódio também reduziu em 85% a atividade na concentração utilizada nos tampões de purificação, bem como o imidazol, que reduziu em até 94% a atividade na concentração de 500 µM. Já o EDTA não foi capaz de alterar a atividade enzimática. Dentre os 24 compostos naturais testados, os óleos essenciais de Litsea cubeba, Cananga odorata, Salvia sclarea e Citrus limon apresentaram bons resultados de inibição, atingindo IC₅₀ entre de 53 e 76 µg/mL. O presente trabalho analisou, a partir da literatura, os diferentes padrões de indução para dois importantes alvos da COVID-19, convergindo para um padrão de melhor expressão, bem como analisou diferentes aditivos e tampões para os testes de atividade enzimática, propondo uma composição eficiente para análises futuras que tenham como alvo a PLpro de coronavírus. Por fim, foram indicados pelo menos três óleos essenciais com boa atividade inibitória para mais estudos farmacológicos. 

No ano de 2019, o vírus SARS-CoV-2 (coronavirus 2 da síndrome respiratória aguda grave) foi descrito como responsável pela COVID-19. Essa doença se apresentou com quadro heterogêneo, em que os casos mais graves foram caracterizados pela hiperativação do sistema imunológico, ocasionando uma tempestade de citocinas e dano de múltiplos órgãos. Devido às suas funções imunorregulatórias e regenerativas, as células-tronco mesenquimais (CTMs) passaram a ser investigadas como alternativa terapêutica para tratamento dos casos graves de COVID-19. Neste trabalho, inicialmente buscamos potencializar o efeito imunossupressivo de CTMs derivadas de tecido adiposo. Posteriormente, testamos a capacidade dessas células em controlar a resposta imune de um modelo in vitro de inflamação de célula pulmonar gerado por antígenos do SARSCoV-2. Inicialmente, testamos diferentes estratégias inflamatórias e de modulação epigenética para potencializar o efeito imunossupressivo das CTMs. Nessa fase, identificamos que o licenciamento com INF-γ foi capaz de realçar o perfil antiinflamatório das CTMs. Posteriormente, testamos células Calu-3 e A549, quanto aos receptores clássicos de entrada do vírus, para estabelecermos um modelo de inflamação pulmonar induzida por antígenos do SARS-CoV-2. As células Calu-3 apresentaram maior expressão dos receptores ACE2 e TMPRSS2 e, quando em meio inflamatório e desafiadas com o antígeno Nucleocapsídeo/Spike (NS), apresentaram níveis elevados de fatores inflamatórios e entraram em processo de apoptose celular. Por fim, para entender a influência da lesão pulmonar induzida pelo vírus sobre a resposta imune, submetemos Células Mononucleares do Sangue Periférico (CMSPs) ao sobrenadante das células Calu3 estimuladas com o antígeno NS e INF-γ. Em paralelo, com propósito terapêutico, adicionamos a esse modelo CTMs licenciadas com INF-γ. Notamos que as CTMs controlaram o processo inflamatório, inibindo a geração de células T de memória e reduzindo a liberação das citocinas IL-6 e IL-10. Além disso, as CTMs licenciadas com INF-γ foram capazes de manter a viabilidade das células T, indicando que o uso das CTMs também promove um papel regenerativo no processo inflamatório gerado no modelo avaliado. Esses resultados são relevantes para o campo da terapia celular, por contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos utilizados pelas CTMs para controlar a resposta inflamatória induzida por componentes do SARS-CoV-2.

O aumento das infecções fúngicas sistêmicas associadas à emergente necessidade de novas alternativas terapêuticas impõem a necessidade de conhecimento dos mecanismos de controle da expressão gênica relacionados à regulação da resposta imune. Dados da literatura demonstram que as infecções fúngicas representam uma causa de morbidade e mortalidade, especialmente no que tange ao universo crescente de imunocomprometidos. Compreender as respostas protetoras do sistema imunológico do hospedeiro às infecções fúngicas pode ajudar a prever a progressão da doença e influenciar diretamente o tratamento e o prognóstico do paciente. Há grande diversidade de espécies de fungos que afetam os seres humanos e que causam estas infecções. Fungos como Paracoccidioides brasiliensis e Cryptococcus neoformans representam importantes agentes patogênicos, os quais são agentes etiológicos da paracoccidioidomicose e criptococose, respectivamente. As principais células que primeiro detectam a infecção são os macrófagos e as células dendríticas, que reconhecem e fagocitam as células fúngicas orquestrando a resposta imune inata e adaptativa que contribui para a erradicação da infecção. A resposta imune do hospedeiro às infecções por patógenos microbianos envolve ampla reprogramação gênica, que é finamente controlada de modo a conter ou eliminar efetivamente o patógeno sem causar danos excessivos ao hospedeiro. Esse estudo visou a caracterização do perfil transcritômico de células da resposta imune em resposta aos modelos de infecção por P. brasiliensis e C. neoformans, a fim de um melhor entendimento das bases moleculares da interação patógeno-hospedeiro. O primeiro trabalho, teve como objetivo a análise do transcritoma de células dendríticas derivadas da medula óssea (BMDCs) de camundongos resistentes (A/J) e suscetíveis (B10.A) à infecção por P. brasiliensis. O segundo trabalho, foi direcionado à análise transcritômica de macrófagos derivados da medula óssea (BMDMs) de camundongos em resposta a linhagens capsulares (B3501) e acapsulares (Cap67) de C. neoformans. Neste sentido, empregamos o sequenciamento de RNA em larga escala (RNA-Seq) para fornecer uma imagem global da expressão gênica do hospedeiro em resposta aos dois modelos de infecção. Os principais resultados mostraram que as BMDCs do camundongo suscetível apresentaram uma resposta mais intensa à infecção por P. brasiliensis, sugerindo que uma precoce reação imunológica exagerada ao fungo pode estar ligada à suscetibilidade do hospedeiro. Por outro lado, os resultados do modelo de infecção por C. neoformans mostraram que uma resposta imune inata e adaptativa é observada mais tardiamente na infecção pelas linhagens capsulares, afetando a apresentação de antígenos e a ativação dos macrófagos. Estes resultados podem fornecer informações avançadas sobre a compreensão do mecanismo celular e molecular da resposta imune às infecções fúngicas.

Escherichia coli consiste em uma bactéria altamente versátil capaz de adquirir vários fatores de virulência específicos, resultando em patótipos que podem causar uma ampla gama de doenças infecciosas. Consequentemente, há uma necessidade de identificar novos fármacos antimicrobianos considerando o desenvolvimento de resistência bacteriana a um amplo espectro de antibióticos. Os mastoparanos são peptídeos catiônicos com propriedades farmacológicas multifuncionais. Mastoparans-R1 e R4 foram projetados computacionalmente com base no mastoparano-L nativo de vespas e têm potencial terapêutico aprimorado para o controle de infecções bacterianas. Aqui avaliamos se esses peptídeos mantêm sua atividade contra cepas de E. coli em uma faixa de concentração fisiológica de sal. Descobrimos que os mastoparanos-R1 e R4 preservaram sua atividade nas condições testadas, incluindo atividades antibacterianas em concentrações salinas fisiológicas. A estrutura secundária geral dos peptídeos foi investigada usando espectroscopia de dicroísmo circular em uma variedade de solventes. Não foram observadas alterações significativas na estrutura secundária (arranjo aleatório em soluções aquosas e α-hélice em ambientes hidrofóbicos e aniônicos). As estruturas tridimensionais de mastoparano-R1 e R4 foram elucidadas por espectroscopia de ressonância magnética nuclear, revelando segmentos α-helicoidais anfipáticos para Leu3- Ile13 (mastoparan-R1) e Leu3-Ile14 (mastoparan-R4). Possíveis mecanismos de associação de membrana para mastoparano-R1 e R4 foram investigados por ressonância plasmônica de superfície e estudos de extravasamento de carboxifluorosceína com bicamadas lipídicas e vesículas sintéticas de POPC e POPC/POPG (4:1). Mastoparano-L teve a maior afinidade para ambos os sistemas de membrana, enquanto os dois análogos tiveram associação mais fraca, porém com maior seletividade em lisar membranas aniônicas. Esses achados também corroboram com simulações de dinâmica molecular, onde os peptídeos mastoparano-R1 e R4 têm maiores interações com membranas miméticas bacterianas em comparação com modelo de membranas de mamíferos. Apesar de apresentarem algumas diferenças em seus perfis funcional e estrutural, o análogo de mastoparano-R1 se destacou pela sua maior atividade maior atividade, maior potencial bacteriostático, bactericida e seletividade para lise de membranas aniônicas. Este estudo reforça o potencial do mastoparano-R1 como candidato a fármaco, bem como modelo para estudo e desenvolvimento de peptídeos antimicrobianos mais seletivos.

O alfaherpesvírus humano 1 (HHV-1) tem sido considerado como uma infecção viral sexualmente transmissível e representa um problema de saúde global. Apesar de ser um vírus conhecido e possuir protocolo de tratamento, a infecção ainda é incurável, e o surgimento de resistência viral é um fator preocupante, especialmente para pacientes imunocomprometidos. Por esta razão, vários estudos têm demonstrado o potencial dos peptídeos antimicrobianos derivados do veneno de artrópodes, como os peptídeos da família dos mastoparanos, derivado do veneno de Vespula lewisii que já mostraram atividade antibacteriana, antifúngica e antiviral. Dessa forma, a partir de desenho racional, dois peptídeos foram criados a partir do mastopano L, sendo o [I5 , R8 ] mastoparano e o mastoparano-MO. O objetivo deste trabalho consistiu em determinar se o mastoparanos síntéticos derivados do mastoparano L possuiam potencial antiviral. Inicialmente, para o peptídeo [I5 , R8 ] mast foi realizado um estudo da sua estrutura, e as análises de CD e RMN revelaram que este peptídeo forma uma α-hélice em SDS25. Por conseguinte, em ensaios in vitro, os mastoparanos testados apresentaram baixa citotoxicidade contra células Vero e até 90% de inibição do alfaherpesvírus 1 pelos ensaios de plaque, na concentração de 50 µg.ml-1 . Além disso, foi possível inferir que o [I5 , R8 ] mast inibe a replicação viral de forma dose-dependente, possui atividade virucida e interfere em estapas iniciais da infecção causando até 99% de inibição. Já o mast-MO demonstrou inibição acima de 90% apenas na concentração 50 µg.ml1 , e foi capaz de inibir a etapa de penetração viral, atingindo até 99% de inibição. Ademais, ensaios com sondas fluorescentes demonstraram que o peptídeo [R8 ] masto não interfere na fluidez de modelos de membranas, mas foram insuficientes para determinar completamente se este peptídeo interage ou não com membranas. Para tanto, os resultados obtidos demonstram os mastoparanos testados apresentam potencial para uso como medicamentos antivirais

INTRODUÇÃO: O vírus Zika é um flavivírus transmitido por mosquitos que pode causar infecção congênita, microcefalia e síndrome de Guillain-Barré em humanos. O fator de transcrição nuclear NF-κB é um regulador chave da inflamação, da sobrevivência celular e da resposta imune, que pode ser ativado por diferentes vias canônicas e não canônicas. Alguns compostos naturais ou sintéticos, como o atazanavir, a curcumina e o lopinavir têm demonstrado efeitos moduladores sobre a via do NF-κB, podendo interferir na progressão da resposta imunológica das células mononucleares do sangue periférico de gestantes e de células de neuroblastoma. O atazanavir e o lopinavir são antivirais que inibem a protease do HIV e a curcumina é um pigmento extraído do açafrão-da-terra, que tem propriedades anti-inflamatórias, sendo capaz de inibir a ativação do NF-κB em vários tipos de células. Esses compostos podem representar potenciais agentes terapêuticos para doenças relacionadas ao NF-κB e em infecções como pelo vírus Zika. OBJETIVOS: O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito dos compostos atazanavir, curcumina e lopinavir nas vias canônica (que controla a resposta inflamatória) e não canônica de ativação do NF-kB, em células de neuroblastoma e células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de mulheres gestantes e não gestantes, incubadas in vitro com o vírus Zika. MATERIAIS E MÉTODOS: O estudo investigou por citometria de fluxo os efeitos da incubação in vitro com o vírus Zika e do tratamento in vitro com as drogas atazanavir, curcumina e lopinavir na expressão dos receptores para o TNF (rLTX, r1TNF e r2TNF) e das moléculas envolvidas na via do NFkB em células de neuroblastoma SKnBe e células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de mulheres controles normais e mulheres gestantes. A produção de citocinas inflamatórias e imunológicas foi quantificada por citometria de fluxo. Os seguintes grupos de estudos foram avaliados nos neuroblastomas e nas CMSP: 1) Controle (Cont), 2) incubados com o vírus Zika (ZKV), 3) tratados com atazanavir (Ataz), 4) tratados com atazanavir e incubados com o vírus Zika (Ataz+ZKV), 5) tratados com curcumina (Curc), 6) tratados com curcumina e incubados com o vírus Zika (Curc+ZKV), 7) tratados com lopinavir (Lopi) e 8) tratados com lopinavir e incubados com o vírus Zika (Lopi+ZKV). Para avaliação da cinética das citocinas os seguintes grupos de estudo foram formados: 1) Zika, 2) atazanavir+Zika, 3) curcumina+Zika e 4) lopinavir+Zika. A adsorção do vírus Zika foi feito após 30 min de incubação das placas contendo as células e os tratamentos iniciaram após 1 h de adsorção do vírus, permanecendo em tratamento por 6 horas. O grupo de gestantes estudadas eram normais com o índice de massa corporal (IMC) das voluntárias e os exames pré-natais das gestantes dentro da normalidade. Foram avaliados por citometria de fluxo, os receptores para linfotoxina (rLTXβ) e receptores para o TNF (r1TNF e r2TNF), as moléculas FADD, TRAF, NIK, JNK, IkB, P50, P52, P65 relA, relB e c-Rel nas células do neuroblastoma e na CMSP, e as citocinas Imunes: FNT, IFN-γ, IL-12p70, IL-2, IL-10, IL-4, IL-17A, as inflamatórias: IL-8, IL-1, IL, IL-10, FNT, IL-12p70 nos sobrenadantes das culturas dos neuroblastomas e CMSP e as quimiocinas: CXCL8/IL-8, RANTES, CXCL9/MIG, CCL2/MCP-1, CXCL10/IP-10 nos sobrenadantes das culturas das CMSP. Os resultados foram analisados pelos testes de ANOVA ou KruskalWallis, ANOVA para medidas repetidas ou Teste de Friedamn, teste t ou Mann-Whitney, segundo as indicações e considerado significante para p<0,05. RESULTADOS: Por microscopia eletrônica observamos a presença das partículas do vírus Zika no citoplasma dos neuroblastomas. Observamos inibição do crescimento do vírus Zika pelo tratamento com o atazanavir no período de 6 a 24 horas após a incubação. Com o tratamento com a curcumina houve redução do crescimento do vírus nas primeiras 6 horas após a incubação e com o lopinavir houve redução do crescimento entre os primeiros períodos após a infecção. Nossos resultados mostraram que os neuroblastomas apresentaram constitutivamente o rLTXβ, já mostrando maior expressão do receptor no grupo controle. Nos grupos incubados apenas com o vírus Zika, e os grupos atazanavir+zika, curcumina, curcumina+zika, lopinavir e lopinavir+zika houve maior expressão do r2TNF. Já nas CMSP, as não gestantes apresentaram em todos os grupos maior expressão do r1TNF e as gestantes expressaram o rLTXβ. Na avaliação das moléculas da via do NFkB nos neuroblastomas, a molécula FADD foi mais expressa que a molécula TRAF em todos os grupos de estudo, e esse padrão foi semelhante na comparação entre a expressão da molécula NIK e JNK, sendo a molécula de maior expressão das moléculas finais da via foi o c-Rel. Na avaliação das moléculas da via do NFkB nas CMSP tanto das gestantes quanto das não gestantes, não houve diferenças significativas dentro de cada grupo, sendo que os níveis expressos de cada molécula foram semelhantes. Na avaliação da expressão das moléculas ligadas às vias do NFkB, no controle (basal) os neuroblastomas expressaram constitutivamente o rLTXβ, FADD, NIK, IkB e c-Rel, com produção de IL-8 e IL-6. E nas CMSP das não gestantes o receptor de maior expressão foi o r1TNF e nas gestantes o rLTXβ, como também a produção de IL-6, IL-8, IL-1β, TNF e as quimiocina MCP-1 e RANTES. Nas CMSP, não houve diferença na expressão das outras moléculas da via. Na incubação com o vírus Zika, houve maior expressão do cRel nos neuroblastomas e menor expressão de relB, com produção aumentada de IL-8 e IL-6. Nas CMSP houve maior expressão do relA em não gestantes, e maior produção de IL-8, TNF, MCP-1 e nas gestantes houve maior produção de IL-8, IL-6, TNF e IL1β. No tratamento com o atazanavir, nos neuroblastomas o c-Rel continuou mais expresso, porém notou-se aumento na expressão da molécula P52, com redução de IL-6, mantendo os níveis de IL-8. Já nas CMSP, as não gestantes apresentaram maior expressão da molécula P52, sem variação na expressão das citocinas e nas gestantes houve maior expressão da molécula relA, com aumento na produção de IL-8. No grupo atazanavir+zika, para os neuroblastomas, o c-rel continuou a ser a molécula mais expressa, porém, o P52 apresentou aumento e não apresentou diferença na expressão de IL-6 e IL-8 e nas CMSP a molécula mais expressa foi relA para não gestantes, sem alteração na produção das citocinas e também para gestantes, com aumento de IL-8 e IL-1β. No tratamento com a curcumina, o c-Rel continuou a ser a molécula mais expressa pelos neuroblastomas, porém teve aumento da molécula P52 e do relA e redução na produção da IL-6 e IL-8 e nas CMSP, tanto as gestantes quanto as não gestantes, expressaram relA e não modificaram a produção das citocinas. No grupo curcumina+Zika, os neuroblastoma continuaram a expressar o c-Rel, com aumento de relA e P52 e não modificaram a produção de citocinas, e as CMSP apresentaram maior expressão do relA, tanto em não gestantes, que aumentaram IL-8 e IL1β quanto em gestantes, que produziram mais IL-6, IL-8 e IL-1β. No tratamento com o lopinavir, os neuroblastomas apresentaram apenas a molécula c-Rel elevada, com redução de IL-6 e sem alteração de IL-8 e as CMSP das não gestantes, não apresentaram diferença na expressão dessas moléculas e as gestantes continuaram a expressar o relA mais elevado que as outras e em relação as citocinas, não houve modificação na produção. No grupo lopinavir+Zika, os neuroblastomas expressaram c-Rel e maior expressão de P52, sem modificar a expressão de citocinas e nas CMSP, as não gestantes não mostraram diferenças de expressão das moléculas e na produção de citocinas e as gestantes apresentaram o relA mais elevado e aumrnto de IL-8. CONCLUSÕES Pela microscopia eletrônica foi confirmado que o vírus Zika infecta os neuroblastomas. A inibição direta do crescimento do vírus mostrou que o atazanavir, a curcumina e o lopinavir podem ter uma ação direta reduzindo o crescimento do vírus Zika. Os neuroblastomas apresentaram perfil de respostas de citocinas de moléculas da via do NfkB diferente das CMSP de gestantes e não gestantes, sugerindo que os mecanismos imunopatogênicos do vírus Zika foram diferentes. O perfil de ativação do NFkB foi sugestivo para a via não canônica em neuroblastoma e nas CMSP de gestantes, por expressarem o rLTXβ, porém as moléculas ativados juntamente com esse receptor, mostram um perfil que tende para a via canônica e a incubação com o vírus mostrou que os neuroblastomas tendem a uma resposta pelo r2TNF, destacando seu perfil canônico. As CMSP de não gestante expressaram o r1TNF, com ou sem infecção viral, o que nos sugere uma resposta canônica. As citocinas detectadas nesse estudo e que também sofreram variação têm perfil de ativação canônico. Os compostos estudados não afetaram o tipo de resposta, mas atuaram na intensidade responsiva das células. Estudos da imunopatogenese do vírus Zika e que verifiquem a modulação, por meio das drogas, da intensidade de respostas dessas células à infecção viral e também à condição gestacional são necessários para definir a utilização dessas drogas para utilização no tratamento da infecção pelo vírus Zika. A utilização da curcumina como suplementação na gestação e ou uso do atazanavir ou lopinavir para tratamento visariam amenizar ou proteger o feto de uma das piores consequências da doença Zika, que é a microcefalia, mas para esse objetivo ser alcançado requer ainda mais estudos desses compostos.

A colite ulcerativa e a doença de Crohn fazem parte do grupo de
doenças inflamatórias intestinais, caracterizadas pela inflamação do trato gastrointestinal
(TGI). Ainda não há cura para essas doenças e os tratamentos disponíveis visam a diminuição
dos sintomas e contenção do avanço das doenças. Uma das abordagens clínicas eficientes é o
uso de inibidores de TNF como o anticorpo recombinante Infliximab (Remicade®). No entanto,
a imunoterapia com anticorpos monoclonais ainda apresenta alto custo e toxicidade
intrínseca, sugerindo a necessidade de alternativas menos tóxicas e mais acessíveis. Esse
trabalho investigou a utilização da bactéria gram-negativa Zymomonas mobilis como veículo
potencial para expressão dos anticorpos recombinantes anti-TNF e anti-CD3 no TGI de
camundongos para reduzir os efeitos da colite ulcerativa induzida por DSS. Para isso, foram
construídos três vetores de expressão de Z. mobilis contendo os genes que codificam para as
regiões variáveis do mAb infliximab no formato de cadeia única (scFv), e do anticorpo murino
anti-CD3 145-2c11, nos formatos scFv e FvFc. Com o tratamento realizado foi possível observar
que a administração de Z. mobilis contendo ou não os plasmídeos de interesse foi efetiva na
diminuição da inflamação, indicada pela estabilidade na perda de peso, no índice de atividade
da doença e na melhora dos índices histopatológicos. Somado a isso, o tratamento com Z.
mobilis restaurou a barreira mucosa além de aumentar a expressão dos genes Muc3 e Ocln e
potencializar um fenótipo regulador, induzindo genes imunomoduladores como Tgfb, Il5, Il10
e Foxp3 e reduzindo a expressão relativa de mRNA das citocinas pró-inflamatórias Tnf, Il6 e
Il17. A análise do microbioma sugere que a Z. mobilis pode alterar a microbiota intestinal,
aumentando a abundância de bactérias como a Akkermansia muciniphila e diminuindo
Escherichia coli. Por fim, os dados sugerem que Z. mobilis pode aliviar a progressão da doença
e ser considerado um possível adjuvante probiótico para o tratamento das doenças
inflamatórias intestinais.

A histoplasmose, causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum, é uma micose de grande importância clínica devido ao seu caráter oportunista e sistêmico. O habitat natural do H. capsulatum resume-se, principalmente, a ambientes que possuem aves ou morcegos, como cavernas, galpões, lugares abandonados e etc. Os excrementos desses animais são ricos em nitrogênio/fósforo, sendo estes, compostos cruciais para o metabolismo e crescimento do fungo. A infecção inicia-se pela inalação de microconídios oriundos da fase filamentosa, que se fixam nos alvéolos pulmonares e começam o processo de diferenciação celular em levedura. As leveduras utilizam de mecanismos para evadir do sistema imune e podem infectar outros órgãos como baço e fígado. Nos casos mais graves pode levar o paciente a óbito, principalmente pacientes imunocomprometidos como portadores de AIDS e transplantados. Foi utilizada a técnica de qPCR para identificar o gene HC100, que é específico desse fungo. Amostras de solo de cavernas do Distrito Federal, Goiás e Minas Gerais, apresentaram resultado positivo. Com esses dados, futuros visitantes dessas cavernas saberão sobre o risco de contaminação por H. capsulatum e sinalizar para futuros acadêmicos onde este fungo pode ser encontrado para estudo. A qPCR, para o H. capsulatum, também é uma técnica nova e estudos como esse auxiliam na melhor padronização dela e testagem em diferentes amostras de diferentes origens. 

O fungo Cryptococcus neoformans é o principal agente etiológico da criptococose, afetando principalmente indivíduos imunocomprometidos. A doença tem o pulmão como sítio primário, apresentando tropismo pelo Sistema Nervoso Central onde sua principal manifestação clínica é a meningoencefalite. É um importante problema de saúde pública, que tem seu diagnóstico de forma tardia e os dados epidemiológicos subestimados. A cápsula, a melanina e a lacase são fatores de virulência marcantes, sendo um campo promissor para entendimento da patogênese e promoção de alvos terapêuticos mais adequados. A melanina de C. neoformans exerce um impacto na proteção contra a resposta imune efetora e também dificultando a ação de antifúngicos. Nosso grupo estudou os efeitos imunomodulatórios da melanina de C. neoformans na interação com macrófagos murinos por meio de ensaios de fagocitose e também detecção de Fagocitose associada a LC3 (LAP), com duas cepas fúngicas: o selvagem H99 e o mutante para lacase LAC1. Observamos que sem suplementação para melanização o selvagem era mais fagocitado que o mutante, o que mudou com a adição da suplementação para melanina. Com relação ao mutante apenas após 48 horas de suplementação verificamos efeitos na fagocitose. Quanto a detecção de LAP, sem estímulo para produção de melanina, o mutante demonstrou maior ocorrência de LAP que o selvagem. Quando adicionamos suplementação vimos que a melanização de C. neoformans não trouxe efeitos significativos sobre o selvagem e no mutante apenas após 48 horas de suplementação. Esses resultados em conjunto, sugerem que haja outros interferentes que não apenas melanina na resposta de macrófagos.

A hipercolesterolemia familiar (HF) é uma dislipidemia de origem genética causada pelo prejuízo
funcional do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDLR), com subsequente distúrbio no
metabolismo de lipoproteínas e acúmulo de colesterol na circulação sanguínea. O alto nível de
colesterol circulante presente na lipoproteína de baixa densidade (LDL) produz efeitos
prejudiciais no metabolismo celular, no desenvolvimento de tecidos e na bioenergética
mitocondrial. Disfunções mitocondriais em diversos tecidos biológicos já foram descritas em
modelos de HF, entretanto, a grande maioria dos estudos incluiu apenas indivíduos machos nas
análises. Considerando que as disfunções metabólicas são impactadas diferentemente
dependendo do sexo do indivíduo, faz-se importante estudar o impacto do dimorfismo sexual nos
desfechos bioenergéticos em modelo de HF. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar e
comparar o efeito do dimorfismo sexual sobre a função mitocondrial de hipocampo, tecido
adiposo marrom (BAT), fígado e coração em camundongos C57Bl/6 selvagens e nocautes para
o LDLR (LDLR-/-). Foram utilizados camundongos machos e fêmeas C57Bl/6 e LDLR-/- com
aproximadamente 6 meses de idade. Os animais foram anestesiados e eutanasiados para a
coleta de sangue, destinado para a análise de triglicerídeos e colesterol total. Homogenatos dos
hipocampos e do BAT e mitocôndrias isoladas de fígado e coração foram utilizados para
avaliação do consumo de oxigênio por respirometria de alta resolução (RAR). Os camundongos
machos e fêmeas LDLR-/- apresentaram aumento significativo nos níveis de colesterol e
triglicerídeos quando comparados com os animais selvagens do mesmo sexo. No hipocampo de
camundongos machos, a deleção genética do LDLR causou uma diminuição significativa do
consumo de O2 relacionado à atividade do complexo I+II, à fosforilação oxidativa e à capacidade
respiratória máxima, quando comparados aos animais selvagens. Apesar de não serem
observadas diferenças nesses mesmos parâmetros hipocampais entre as fêmeas LDLR-/- e
C57Bl/6, os mesmos foram significativamente menores em fêmeas selvagens em relação aos
machos de mesmo genótipo. No BAT de machos LDLR-/- também houve diminuição significativa
na respiração mitocondrial relacionada à atividade da UCP-1 e na capacidade de reserva
respiratória, comparados aos selvagens. A capacidade respiratória máxima do BAT de fêmeas
selvagens foi significativamente menor quando comparada aos machos selvagens. Por outro
lado, as fêmeas LDLR-/- apresentaram diminuição significativa no consumo de O2 relacionado à
atividade do complexo I+II no fígado, em relação às selvagens. Ambos os sexos não
apresentaram diferenças significativas na bioenergética mitocondrial no coração. Os resultados
sugerem que a deleção do LDLR afeta a bioenergética mitocondrial de diversos tecidos, com
maior impacto em machos do que fêmeas, reforçando a importância de estudos da HF serem
realizados em ambos os sexos, já que o dimorfismo sexual é um fator que impacta os desfechos
dessa doença.

A bactériaPseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista, cuja virulência e mecanismo de interação com o hospedeiro são controlados por moléculas de sinalização dependentes da densidade celular, denominadas sensoriamento quórum sensing (QS). Este patógeno apresenta dois tipos de moléculas de sinalização QS, as lactonas N-Acil- homoserina e o sinal 2-heptil-3-hidroxi-4-quinolona. As células-tronco mesenquimais (CTMs) têm sido exploradas para tratar uma variedade de condições clínicas, especialmente distúrbios imunológicos. Nesse sentido,vários estudos demonstraram que o priming das CTMs com INF-γ aumenta a propriedade imunomoduladora dessas células.No presente estudo,investigamos a influência do QS N- (3-oxododecanoil) -L-homoserina (OdDHL) sobre as propriedades biológicas de CTMs submetidas ou não ao priming com INF-γ. Por uso do teste MTT, demonstramos que, após 24h de cultura celular, o OdDHL (10 e 50µM) compromete a viabilidade das CTMs, independente do priming com INF-γ. Através de ensaio de apoptose celular com Anexina/PI, por Citometria de Fluxo, observamos que o OdDHL (10 e 50µM) induz apoptoseem CTMs e que esse efeito parece ser mais pronunciado em CTMs licenciadas com INF-γ. Em linha, as CTMs submetidas ao tratamento com 50µM OdDHL apresentaram maior liberação da enzima de lactato desidrogenase (LDH) no meio extracelular, efeito que foi realçado pelo priming dessas células com INF-γ. Curiosamente, em concentrações não tóxicas, de 0,5 e 1µM, observamos que o OdDHL realçou o potencial migratório das CTMs, principalmente, nas células  não licenciadas. Entretanto, nessas mesmas doses, notamos que OdDHL diminuiu o potencial imunossupressivo das CTMs. Demonstramos ainda, funcionalmente, que e as CTMs inibem de forma direta o crescimento de Pseudomonas aeruginosa. Como pode ser visto, demonstramos nesse estudo que o licenciamento com INF-γ aumenta o potencial imunossupressivo das CTMs, mas não protege essas células dos efeitos deletérios promovido pela elevada concetração de OdDHL. Mais importante, o licenciamento das CTMs com INF-γ parece comprometer de modo significativo o efeito antimicrobiano das CTMs quando essas células são desafiadas a controlar o crescimento da bactéria Pseudomonas aeruginosa. Apesar do nosso estudo ser desenvolvido in vitro, os achados obtidos servem de alerta para os efeitos de moléculas QS sobre as propriedades das CTMs, indicando que quando em baixas doses essas moléculas podem até potencializar propriedades importantes das CTMs, mas em doses mais elevadas elas comprometem a viabilidade dessas células, independente do licenciamento com INF-γ.