A cultura da banana (Musa spp.) é uma das frutas mais consumidas no mundo e está sujeita a estresses abióticos e bióticos. A seca e nematoides são um problema em grandes áreas produtoras, principalmente devido a suscetibilidade das cultivares comerciais que estão sujeitas ao estresse hídrico e a infecção pelo endoparasita formador de galhas radiculares Meloidogyne incognita. Embora um número limitado de estudos tem sido voltados para compreender a resposta do hospedeiro a esses estresses individualmente, há falta de pesquisa sobre as respostas ao estresses abiótico e biótico combinados. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar o transcritôma das raízes da cultivar tolerante a seca Musa acuminata genótipo G-75 em resposta à seca, infecção por M. incognita e a combinação de ambos os estresses “cross-stress”. O RNA total das raízes da cultivar G-075 foi extraído 21 dias após a inoculação com juvenis J2 de M. incognita, após o estresse hídrico, “cross-stress” e de plantas controle não desafiados. A análise fisiológica das plantas revelou estresse hídrico moderado após 14 dias de privação de água, com estresse hídrico severo após 21 dias. Bibliotecas de cDNA representando esse último ponto temporal foram sequenciadas usando a tecnologia Illumina Novaseq 6000 S4. Sequências de alta qualidade foram mapeadas no genoma de referência de M. acuminata spp. malaccensis var. Pahang (versão 4), permitindo a identificação e classificação de genes diferencialmente expressos (DEGs) nos tecidos das raízes parasitadas pelo nematoide, estresse hídrico e ao “cross-stress”, em comparação com a expressão gênica em plantas não estressadas. O sequenciamento gerou um total de 359.425.623 sequências paired-end, com 287.982.958 sequencias mapeadas no genoma de referência. Estas representam um total de 34.317 genes, com 5.090 DEGs identificados entre todos os tratamentos, em comparação com os controles não desafiados. Um total de 573 DEGs foram identificados nas bibliotecas de plantas infectadas por nematoides, em relação aos controles não inoculados. A análise de enriquecimento revelou termos GO sobrerepresentados relacionados à atividade catalítica, atividade oxidoredutase, ligação a carboidratos e ligação a ácidos nucleicos. Em resposta à seca, um total de 2.834 DEGs foram identificados, com termos GO sobrerepresentados incluindo resposta a estímulos, atividade catalítica e ligação a ácidos nucleicos. Em resposta ao cross-stress, um total de 1.683 DEGs foram identificados, dos quais 241 genes eram comuns a todos os estresses. Nessa condição, as categorias GO enriquecidas compreendiam resposta a estímulos, atividade catalítica, atividade oxidoredutase e ligação a ácidos nucleicos. Os genes candidatos regulados positivamente para cada estresse foram validados via RTqPCR para confirmar a tendencia do RNA-seq. Em respostas a M. incognita, genes que codificam NLRs, RLKs, transportadores ABC, bem como, genes envolvidos na produção de calose, vias de auxina, ácido abcisico (ABA) e ácido jasmonico foram regulados positivamente, para o estresse hídrico e o crossstress, DEGs regulados positivamente incluíram aqueles envolvidos em resposta a frio, salinidade, temperatura e lesões, bem como estresse oxidativo, vias de ABA, auxina e etileno. A análise das raízes de uma cultivar tolerante a seca desafiada com a infecção por M. incognita aprimora a compreensão de como a planta responde aos estreses bióticos, abióticos e a combinação deles, fornecendo genes candidatos para o melhoramento genético em Musa para tolerância a múltiplos estresses.

A seca dos ponteiros, doença bacteriana causada por Erwinia psidii, é considerada uma importante doença da cultura da goiabeira (Psidium guajava L.) e do eucalipto (Eucalyptus spp.), chegando a causar entre 30 e 85% de perdas, é um dos principais fatores limitantes da produção. Uma vez que a principal forma de disseminação da doença é através de material vegetal propagativo assintomático, métodos sensíveis, rápidos e acurados para a detecção do patógeno em plantas assintomáticas são necessários para a diagnose precoce. Assim, o objetivo deste trabalho consiste no desenvolvimento de um ensaio de detecção molecular de amplificação isotérmica (LAMP) para detecção de Erwinia psidii na cultura da goiaba e do eucalipto. Em busca de regiões genômicas exclusivas para E. psidii, foi realizada a análise de genômica comparativa com o software RUCS, comparando as sequências do alvo juntamente com as regiões de diversos agentes fitopatogênicos que acometem as culturas da goiaba e do eucalipto. Das 842 regiões exclusivas, somente as cinco com maior potencial foram usadas para o desenho de conjuntos de primers. Além dessas, a região recA, anteriormente usada para o desenvolvimento de primers específicos para PCR convencional e qPCR, também foi selecionada. Os sete conjuntos de primers foram desenhados na plataforma NEB® LAMP Primer Design Tool. A verificação de compatibilidade dos primers foi realizada utilizando o isolado tipo IBSBF435, onde foram avaliadas duas temperaturas (60 e 65 ºC) e seis intervalos de tempo (30, 40, 50, 55, 60 e 75 minutos). A temperatura de 65 ºC, com mudança de cor para quatro dos sete conjuntos, a partir de 50 minutos. Em seguida, foi realizado um ensaio para examinar a proporção entre primers internos e externos para aprimorar o LAMP. A proporção 8:1 (mais diluído) foi capaz de resultar em amplificação três dos quatro conjuntos, enquanto na concentração de 4:1, todos os quatro conjuntos foram capazes de amplificação. A sensibilidade do conjunto de primers mais promissor (Ep19) foi testada com sete diluições do DNA extraído do isolado tipo, entre 10 e 1x10-4 ng.µL-1 . O ensaio alcançou a sensibilidade para detectar até 1x10-3 ng.µL-1 .

O fungo Sclerotinia sclerotiorum, causador do mofo branco e de doenças de podridão do caule em diversas culturas, é um organismo necrotrófico que utiliza proteínas e metabólitos secretados para matar as células do hospedeiro. Estudos indicam que atualmente existem 425 espécies documentadas como hospedeiras desse fungo altamente destrutivo. Sua sobrevivência ocorre principalmente através de escleródios, agregados de hifas melanizadas que persistem no solo por longos períodos. Os escleródios podem germinar miceliogenicamente ou carpogenicamente, sendo este último o modo dominante de infecção. A disseminação do fungo ocorre por meio de ascósporos transportados pelo vento, resultando em infecções diretas na planta em condições ideais de temperatura e umidade. S. sclerotiorum é conhecido por causar danos significativos às culturas, resultando em perdas econômicas substanciais, especialmente em condições ambientais favoráveis. A falta de resistência total do hospedeiro e a vasta gama de plantas suscetíveis contribuem para os impactos prejudiciais dessa patologia, que podem variar de 35 a 50%, chegando a proporções mais graves de 80 a 100% em situações extremas. A presença de micélio branco nos tecidos afetados é um sinal identificável, mas não há sintomas exclusivos comuns em todos os hospedeiros. A resistência a S. sclerotiorum torna-se crucial, e os parentes silvestres do amendoim surgem como fontes valiosas de genes resistentes a doenças. Essas espécies selvagens, como A. duranensis e A. stenosperma, apresentam altos níveis de resistência a certas doenças, com estudos anteriores prospectando e identificando genes dessas espécies, utilizando abordagem transcriptômica para compreender as respostas a estresses bióticos e/ou abióticos. O presente estudo examinou os efeitos da superexpressão de genes candidatos de espécies selvagens de Arachis, potencialmente envolvidos em respostas de defesa a estresses bióticos. Utilizando Arabidopsis thaliana e Nicotiana tabacum como plantas modelo, o objetivo foi compreender como esses genes influenciam a interação com S. sclerotiorum por meio de avaliações fenotípicas e subsequentes avaliações moleculares. Uma metodologia de inoculação foi inicialmente estabelecida para folhas destacadas, com bioensaios conduzidos utilizando seis genes de ambas A. duranensis e A. stenosperma. O estudo abordou a superexpressão de genes específicos, como AdEXLB8 e AsTIR19, em plantas transgênicas para avaliar sua influência na resistência a S. sclerotiorum. A superexpressão de AdEXLB8 mostrou aumento na tolerância, sugerindo seu potencial como gene candidato para fortalecer a resistência por meio de modificações na parede celular e ativação de vias de sinalização de fitohormônios. A análise de AsTIR19 destacou a complexidade na interação planta-patógeno, revelando insights sobre mecanismos moleculares, como a indução de espécies reativas de oxigênio, e ressaltando a engenharia genética como uma ferramenta promissora para melhorar a resistência. Além disso, AsECHI1 isolado e em combinação com AdEXLB8 resultaram em redução significativa de lesões fúngicas, indicando a eficácia de estratégias piramidais na ampliação do espectro de resistência. Por outro lado, a superexpressão dos transgenes AsAOC3, AsTIL e AsSTS4 não apresentou impacto significativo no progresso da doença, evidenciando a complexidade das interações gene-patógeno e a necessidade de abordagens mais abrangentes. A superexpressão desses genes pode oferecer uma abordagem eficaz no desenvolvimento de variedades resistentes para mitigar as perdas causadas por S. sclerotiorum, destacando a importância da investigação genética e da utilização de parentes silvestres no melhoramento de culturas.

A mancha bacteriana é uma das principais doenças que reduzem a produtividade na cultura do tomateiro (Solanum lycopersicum L.). As principais medidas de controle da doença fazem o uso de produtos nocivos ao meio ambiente, além de aumentar o custo de produção. Dessa maneira, este estudo objetivou desenvolver estratégiasinovadoras de controle que driblam essas dificuldades. Nesse sentido, estudou-se a expressão de genes relacionados com a suscetibilidade do tomateiro a Xanthomonas euvesicatoria pv. perforans (Xep), bem como o silenciamento do gene Transcription initiation factor IIA subunit 2 (gamma) (SlTFIIAγ) por meio de ASO (short antisense deoxyoligonucleotide). Os resultados de silenciamento do gene SlTFIIAγ demonstraram que o tratamento com ASO promoveu melhor desempenho das plantas desafiadas com Xep, e portanto, esse gene foi selecionado para avaliação do nocaute por meio de CRISPR/Cas9. O nocaute revelou que houve a edição gênica em sete linhagens T0, sendo cinco apresentando mutações bialélicas e duas quiméricas. Outra estratégia de controle estudada foi a superexpressão em tomateiro de um gene de defesa de Brassica oleracea que codifica para endoquitinase. As plantas transgênicas T2 foram submetidas a um ensaio de resistência a Xep, mas não foi possível observar resistência. Adicionalmente, as plantas foram desafiadas com o fungo Sclerotinia sclerotiorum, e foi observado que dois eventos de transformação demonstraram maior capacidade de suportar o crescimento inicial do fungo. Isso pode estar relacionado com a ação da quitinase na parede celular fúngica. Além disso, o trabalho buscou por novos potenciais genes relacionados com a suscetibilidade por meio de uma abordagem proteômica. Foram identificadas nove proteínas que potencialmente contribuem para o desenvolvimento da doença. As proteínas diferencialmente abundantes foram principalmente relacionadas com o transporte de açúcar, resposta ao estresse e geração de metabólitos e energia. O aprofundamento do estudo destas proteínas poderá proporcionar novos alvos para silenciamento e/ou nocaute gênico visando a resistência a mancha bacteriana.

Begomovirus (família Geminiviridae) corresponde ao maior gênero de vírus de plantas, englobando vírus que possuem uma ou duas moléculas de DNA circular de fita simples, encapsidados separadamente em partículas de 18-30 nanômetros. Isolados com genoma bipartido (apresentando os componentes DNA-A e DNA-B) predominam em tomateiro no Novo Mundo. Os begomovírus são transmitidos com grande eficiência pelo vetor Bemisia tabaci Middle East Asian Minor 1 – MEAM-1 (= biótipo B), que se encontra amplamente distribuído, apresentando hábito alimentar polífago e alta adaptabilidade a diferentes condições ambientais. A introdução de B. tabaci MEAM 1 no início da década de 1990 foi o fator desencadeador de epidemias de begomoviroses em tomateiro no Brasil, com subsequente aumento no número de relatos de novas espécies virais. Além disso, padrões distintos de diversidade e dinâmica de subpopulações virais foram observados em diferentes ambientes. Neste cenário, as plantas daninhas apresentam papel relevante por funcionarem como reservatórios naturais de begomovírus. Novas espécies virais têm sido relatadas em plantas daninhas, incluindo áreas dentro e no entorno de campos comerciais de tomateiro. Alguns begomovírus de plantas daninhas têm sido identificados e caracterizados biologicamente, entretanto acredita-se que estes estudos não tenham sido extensos o suficiente para estimar a real diversidade de novas espécies em plantas daninhas. No país, quatro begomovírus foram relatados infectando concomitantemente o tomateiro e plantas daninhas. A nível global, mais de 40 begomovírus foram descritos em espécies de Malvaceae, sendo que alguns destes foram detectados infectando originalmente espécies de Solanaceae. O genoma pequeno e bipartido somado a eficiência de transmissão e polifagia do vetor propiciam condições favoráveis para a ocorrência de infecções mistas e de eventos de recombinação e pseudorecombinação entre begomovírus, contribuindo assim, para a frequente alteração da estrutura genética das populações virais nas nossas condições. Diferentes estratégias têm 3 sido empregadas para analisar os processos evolutivos capazes de moldar a estrutura genético-molecular dos begomovírus. A principal delas tem sido a obtenção do genoma viral completo (DNA–A e DNA–B) para posterior análise através do uso de diferentes programas e modelos evolutivos. A metagenômica aliada ao High Throughput Sequencing tem permitido determinar uma grande diversidade viral presente no Brasil. Uma grande frequência de infecções mistas vem sendo detectada com muitas delas envolvendo potenciais espécies novas capazes de induzir sintomas severos em plantas. No presente trabalho, quatro contigs provenientes de HTS de amostras foliares de Malvaceae foram selecionados para estudo e caracterização, conforme metodologia realizada pela equipe do LVV-Fito e resumida a seguir. Inicialmente, amostras foliares de plantas daninhas exibindo sintomas típicos de begomovírus (clorose generalizada, mosaico e pontuações cloróticas) foram coletadas em áreas de produção de tomate e/ou áreas próximas ao cultivo de tomateiro, nas cinco regiões do país. As amostragens foram realizadas no período de 2001 a 2020, sendo analisado um total de 78 amostras foliares de plantas da família Malvaceae (selecionadas usando como critérios ano/local de coleta). O DNA total foi extraído via CTAB e solventes orgânicos e armazenado a -20 °C. A confirmação inicial da presença de infecção por begomovírus nas amostras foi feita por meio de ensaios de PCR (reação em cadeia da polimerase) usando primers degenerados ‘PAR1c496’ e ‘PAL1v1978’. O DNA circular viral foi enriquecido nas amostras positivas via amplificação por círculo rolante (RCA). O sequenciamento de alto rendimento (HTS) foi realizado em uma plataforma Illumina HiSeq2500. Os contigs virais foram anotados e as leituras foram mapeadas de volta ao genoma anotado usando a ferramenta ‘Map to reference’ disponível no programa Geneious 11.1.5. Cerca de 7.391.728 milhões de leituras foram obtidas do pool de 78 amostras. Após a montagem, no programa CLC Genomics Workbench 11, foram obtidos 10.679 contigs. Quatro contigs foram selecionados. Três destes contigs correspondiam ao DNA–A completo e exibiram níveis de identidade inferiores a 91%, consistentes com o critério taxonômico atual de definição de novas espécies dentro do gênero Begomovirus. O componente DNA–A da potencial espécie nova #1 apresentou 79% de identidade com Sidastrum golden leaf spot virus (HM357458), a espécie nova #2 apresentou a identidade de 81% com Oxalis yellow vein virus (KM887907), enquanto a nova #3 apresentou a identidade de 78% com Sida yellow mosaic Alagoas virus (JX871383), confirmando a ocorrência de três novas espécies de begomovírus nas plantas daninhas. Os componentes DNA – B foram recuperados e as análises realizadas, incluindo a confirmação de cognatos. O quarto contig apresentou identidade de 98,24% com Sida micranta mosaic virus (SiMMV) (KC706535). Após uso de primers específicos, já disponíveis, obteve-se um resultado de 41 amostras positivas para SiMMV A caracterização destas três espécies, bem como a ocorrência e distribuição de Sida micranta mosaic virus nas cinco regiões brasileiras serão apresentados na presente dissertação.

Os vírus são entidades biológicas comuns em todos os ambientes terrestres, mas pouco se sabe sobre. A avaliação é de que o conhecimento sobre a virosfera eucariótica total seja inferior a 1%. A maior parte da informação está restrita a vírus que causam doenças e perdas econômicas. Outras relações ecológicas e descrição de espécies crípticas de vírus continuam praticamente inexploradas. O segmento de estudo sobre vírus de plantas não é distinto. A compreensão da diversidade, forças evolutivas e seu impacto é desconhecida. No entanto, com o advento do High throughput sequencing (HTS), o estudo do viroma tornou-se tangível e de rápido crescimento. Da mesma forma, as ferramentas de bioinformática melhoraram a compreensão da diversidade viral e dos padrões de evolução. Com a pandemia de SARSCoV 2 e o possível surgimento de novas doenças virais em humanos e em outros eucariotos, é notório a necessidade da exploração e a geração de novas informações sobre a virosfera terrestre. A família Orchidaceae é a segunda maior família de plantas que florescem. Eles crescem predominantemente em áreas tropicais, assim como as espécies da família Bromeliaceae. Os estudos sobre diversidade viral de ambas as famílias são escassos, exceto para as plantas de interesse econômico. Ainda assim, diante de outras espécies economicamente importantes, o volume de pesquisa é incipiente. Neste trabalho, a bioprospecção de viromas foi realizada com espécimes da família Bromeliaceae e Orchidaceae encontradas em cultivos e reservas ecológicas privadas no planalto central. O HTS de DNA e de RNA dessas plantas foram feitos utilizando a plataforma Illumina NovaSeq 6000 e HiSeq 2000, respectivamente. Programas de bioinformática, CLC Genomic Workbench v. 20.0 e Geneious R11.1, foram utilizados para estudar os resultados encontrados no viroma. Dois novos vírus de DNA e sete de RNA foram descritos infectando orquídeas e bromélias. No primeiro capítulo uma revisão bibliográfica sobre o mercado de plantas ornamentais e sobre a incidência de viroses sobre nelas foi desenvolvida com 2 o intuito de explorar o status quo das pesquisas na área. No segundo capítulo a exploração dos resultados de HTS de RNA de 54.088.166 reads e 16.560 contigs foi feita com o intuito de caracterizar os possíveis vírus de RNA presentes. Para isso, os contigs obtidos foram confrontados contra um banco de dados de sequências virais via BLASTn. 15 sequências virais de RNA, até então não caracterizadas foram identificadas. Ao total sete novas espécies virais foram caracterizadas. Sendo uma sequência pertencente ao gênero Alphaendornavirus (família Endornaviridae), duas pertencentes ao gênero Totivirus (família Totiviridae), três pertencentes ao gênero Polerovirus (família Solemoviridae), dois RNA 1 e dois RNA 2 pertencentes ao gênero Dichorhavirus (família Rhabdoviridae) e um RNA 1 e um RNA 2 pertencente ao gênero Nepovirus (família Secoviridae). Três sequencias de RNA 1 relacionados ao gênero Sadwavirus, família Secoviridae, foram identificados. Entretanto, nenhum RNA 2 foi encontrado. De acordo com os critérios de classificação de gênero adotados pelo International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV), as informações encontradas dessas três sequências são insuficientes para estabelecer novas espécies. As sete novas espécies foram nomeadas de Alphaendornavirus monocotyledonae (OQ866133); Dichorhavirus monocotyledonae (OQ866129, OQ866130, OQ866131, OQ866132); Nepovirus monocotyledonae (OQ866134, OQ866135); Polerovirus monocotyledonae 1 (OQ866138); Polerovirus monocotyledonae 2 (OQ866139, OQ866140); Totivirus monocotyledonae 1 (OQ866136); Totivirus monocotyledonae 2 (OQ866137). No terceiro capítulo, encontra-se o prefácio dos locais de coleta, da catalogação de amostra e das metodologias empregada nos capítulos subsequentes, o quarto e o quinto capítulo, em que os 11.060.510 reads e 163.808 contigs de HTS são trabalhados. O quarto capítulo é uma Disease note de infecção mista de dois begomovírus conhecidos, o tomato severe rugose virus (ToSRV) e o tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV), em orquídeas do gênero Dendrobium. O quinto capítulo é uma caracterização de dois patógenos altamente divergentes, pertencentes ao gênero Geminiviridae, infectando orquídeas do gênero Spathoglottis. As duas novas sequências virais, 3 denominadas Spathoglottis-associated mottle virus 1 (OQ791967) e Spathoglottis-associated mottle virus 2 (OQ791968), devem ser consideradas novas espécies. Primers foram desenhados para ambas as sequências e confirmaram a infecção em amostras de orquídeas do gênero Spathoglottis.

Os nematoides-das-galhas (Meloidogyne spp.) representam um dos mais importantes grupos de patógenos radiculares devido aos danos induzidos em uma ampla gama de hospedeiras. O parasitismo por Meloidogyne spp. é um grande obstáculo na produção de cenoura (Daucus carota) em regiões subtropicais, causando perdas de produção e qualidade. No Brasil, as espécies com maior importância na cenoura são M. javanica e M. incognita. A cultivar ‘Brasília’ é a principal fonte de resistência contra estas duas espécies. No entanto, ainda não estão disponíveis sistemas de marcadores moleculares ligados aos fatores de resistência para as cultivares brasileiras de cenoura, que facilitaria o processo de seleção. O tomateiro (Solanum lycopersicum) também é severamente afetado por Meloidogyne spp. com especial destaque para M. enterolobii devido a sua recente expansão geográfica e pela capacidade de “quebrar” a resistência conferida pelo gene Mi-1.2. Todavia, fontes alternativas de resistência no tomateiro a M. enterolobii ainda não estão disponíveis. Ademais, novas metodologias de avaliação nematológicas são necessárias para os processos de seleção de plantas resistentes em ambas as hortaliças. Neste contexto, o presente trabalho objetivou estudar diferentes aspectos das interações de cenoura e tomateiro com espécies de Meloidogyne. Em cenoura, realizou-se um estudo com uma população F2 de 108 plantas da cultivar ‘Brasília #83147’ (que segrega para resistência contra M. javanica). Plantas foram inoculadas com 8000 ovos + eventuais J2 de M. javanica aos 30 dias após a semeadura. DNA total foi extraído de amostras foliares e avaliadas (via PCR) com marcadores do tipo SCAR/STS codominantes (SQ1850R / SQ1700S e SQ6650R / SQ6590S) previamente identificados em estreita ligação com um locus de resistência a M. javanica (Mj-1) em ‘Brasília’. Quanto as análises nematológicas, avaliou-se os sistemas radiculares de plantas individuais aos 120 dias após a inoculação (DAI) quanto ao fator de reprodução (FR = pf/pi) e a quantificação individual de galhas e massas de ovos. Raízes de plantas individuais contrastantes (resistentes e suscetíveis) foram vernalizadas e submetidas a autofecundação (geração S1). O bioensaio de inoculação em conjunto com a análise de marcadores confirmou que a resistência não está fixada nessa população, com muitos indivíduos suscetíveis sendo detectados. No entanto, foi possível identificar indivíduos com resistência extrema (resposta do tipo imunidade) e com a presença dos marcadores SCAR/STS codominantes. Esses indivíduos podem ser agora utilizados com parentais para facilitar estudos genéticos bem como o desenvolvimento de novas cultivares brasileiras de cenoura. Além disso, a escala proposta se apresentou mostrou uma ferramenta de interesse, sendo de fácil e rápida utilização para avaliação de germoplasma. Em tomate, foi avaliado o comportamento de 24 acessos do germoplasma sob diferentes níveis de inóculo de M. enterolobii. O potencial efeito residual do gene Mi-1.2 também foi estudado em ensaios comparativos empregando linhagens isogênicas (isolinhas) contrastantes para esse fator de resistência: ‘Rio Grande’ (mi-1.2/mi-1.2) versus ‘Nemadoro’ (Mi-1.2/Mi-1.2). A condição alélica de cada planta individual foi confirmada via utilização de marcadores moleculares ligados ao locus Mi-1.2. Esse marcador molecular também foi empregado para avaliar a utilização desse gene no panorama varietal brasileiro. Os acessos foram inoculados com quatro níveis de inóculo de M. enterolobii (1000, 2000, 4000 e 8000 ovos + eventuais J2s) aos 15 dias após o transplantio. Quanto as análises nematológicas, as raízes do tomateiro aos 45 dias após a inoculação foram avaliadas de acordo com o índice de galhas (IG), índice de massa de ovos (IMO), número de ovos por grama de raiz (NOGR) e o fator de reprodução (FR). Todos os acessos de tomateiro avaliados apresentaram respostas de suscetibilidade, sendo imprescindível conduzir avaliações mais amplas de coleções de germoplasma em busca de fontes de resistência contra esse patógeno emergente. Por sua vez, o gene Mi-1.2 não conferiu efeito residual significativo contra M. enterolobii, pois embora extremamente efetivo contra pelo menos 13 espécies de Meloidogyne, não se mostrou capaz de interferir no processo de infecção deste nematoide. No processo de inoculação de M. enterolobii, os níveis de inóculo mais adequados variaram de 1000 a 2000 ovos + eventuais J2 para a obtenção da máxima manifestação dos caracteres nematológicos. Diante da importância do tomateiro e da cenoura no Brasil, os resultados deste estudo contribuem substancialmente para os programas de melhoramento visando o desenvolvimento de cultivares resistentes as diferentes espécies de Meloidogyne.

O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma das hortaliças mais importantes tanto economicamente quanto socialmente para o Brasil. Os custos de produção e os níveis de produtividade dessa cultura sofrem oscilações recorrentes devido a diversos fatores, dentre eles se destacam as doenças tais como as begomoviroses (causadas por um complexo de espécies de begomovírus). Esses patógenos possuem uma ou duas moléculas de DNA circular de fita simples, encapsidados separadamente em partículas de 18-30 nanômetros. Begomovírus de genoma bipartido (apresentando os componentes DNA–A e DNA–B) predominam em tomateiro no Novo Mundo, sendo transmitidos por diferentes espécies crípticas do complexo Bemisia tabaci. Esses vetores apresentam hábitos alimentares polífagos apresentando extenso círculo de hospedeiras, incluindo diversas plantas daninhas. A introdução de B. tabaci Middle East Asia Minor 1 – MEAM-1 (= biótipo B) se deu no início da década de 1990, desencadeando epidemias de begomoviroses em tomateiro, com aumento exponencial no número de espécies de Begomovirus. A presença de plantas daninhas, principalmente da família Solanaceae, apresenta um papel de grande importância como reservatório de begomovírus que afetam o tomateiro. Novas espécies virais têm sido relatadas em plantas daninhas, sendo que tais interações propiciam a ocorrência de mecanismos naturais geradores de variabilidade genética, que podem levar à geração de novas variantes virais. O advento da tecnologia de High Throughput Sequencing (HTS) tem proporcionado a descoberta de novas espécies virais associadas com o cultivo do tomateiro. Neste contexto, o presente trabalho tem como um dos objetivos estudar a diversidade viral no tomateiro e plantas daninhas da família Solanaceae. Cento e trinta e cinco (135) amostras foliares de tomateiro e plantas daninhas exibindo sintomas típicos de begomovírus (clorose apical, mosaico dourado e pontuações cloróticas) foram coletadas nas regiões Norte (15), Nordeste (43), Sul (11), Centro Oeste (45), Sudeste (18) e Uruguai (3). As coletas foram realizadas no período de 2003 a 2022, sendo analisadas amostras foliares de S. lycopersicum (92), S. aethiopicum (4), S. paniculatum (3), S. sessiliflorum (1), S. melongena (4), S. mammosum (1), espécies de Capsicum (12), Nicandra physalodes (8), espécies de Physalis (6), S betaceum (2), S. viarum e (1) S. americanum (1). As amostras coletadas foram selecionadas usando como critérios ano/local de coleta. O DNA total extraído foi usado como molde para amplificação por círculo rolante (RCA). Inicialmente, a RCA de cada amostra foi utilizada para confirmação da presença de begomovírus por meio de ensaios de PCR usando primers degenerados para o DNA–A (PAR1c496 e PAL1v1978) e para o DNA–B (PBL e CRC). Após esta etapa, RCA das 135 amostras foram empregadas para formar um pool e sequenciadas em uma plataforma Ilumina NovaSeq 6000. Foram obtidos 19.735.294 milhões reads. Esses reads foram usados para montagens dos contigs no CLC Genomics Workbench 11. Foram obtidos 41.659 contigs sendo que 173 deles exibiram após análises com RefSeqViral identidades com begomovírus (170), topilevírus (1) gemycircularvírus (1) e um alfasatélite. Dezesseis dos 170 contigs de begomovírus apresentaram identidade nucleotídica abaixo de 91%, sendo consistentes com o critério taxonômico atual de definição de novas espécies dentro do gênero Begomovirus. Os contigs C195, C18367 e C2046 apresentaram identidades de 99,1%, 99,67% e 99,92% com tomato apical leaf curl virus (ToALCV; MH539677), plant associated genomovirus 12 (MT214094) e espécies de Alphasatellitidae (MT214093), respectivamente. Com exceção de ToALCV, os outros vírus serão futuramente caracterizados de forma biológica e molecular. Outros três contigs foram considerados potenciais espécies dentro do gênero Begomovirus. Estes três contigs C16, C21 e C230 apresentaram 80%, 94% e 80% de identidade com Melochia mosaic virus (KT201151), tomato bright yellow mottle virus (KC791691) e ToBYMV (KC791691), respectivamente. O alinhamento entre os contigs C16, C21 e C230 mostrou uma organização genômica típica de begomovírus bipartidos e foram denominados como potenciais espécies novas. A região comum foi determinada e análises de iterons e outros motivos confirmaram vírus cognatos. Por outro lado, o contig C21 apresentou organização genômica típica de begomovírus monopartido, representando também uma potencial nova espécie viral. A partir da utilização de HTS foi possível observar a presença de altos níveis de variabilidade genética e de diversidade de begomovírus em membros da família Solanaceae, indicando um relevante papel como reservatórios virais. Ações de pesquisa estão sendo conduzidas visando a produção de clones infecciosos para desvendar gama de hospedeiras bem como fontes de resistência contra esses novos vírus.

Durante seu ciclo de vida, as plantas enfrentam diversos fatores limitantes à sua produção, podendo estes serem de origem abiótica ou biótica, ocorrendo isolados ou simultaneamente. Visando refrear ou impedir o avanço prejudicial de tais fatores, os vegetais possuem um sistema imune que sinaliza possíveis ameaças e ativa diferentes tipos de respostas, como a produção de espécies reativas de oxigênio, transcrição de genes estresse-específicos, entre outros. A seca e os nematóides são restrições à agricultura global que podem ocorrer simultaneamente. A banana (Musa spp.), embora esteja entre as frutas mais consumidas no mundo, é suscetível tanto ao estresse hídrico nas áreas afetadas, quanto à infecção pelo nematóide endoparasita Meloidogyne incognita. Por outro lado, favorecidos por eventos evolutivos, os fitopatógenos adquiriram ao longo do tempo, a capacidade de burlar tais respostas, ou ainda, induzir o hospedeiro a produzir compostos que irão favorecer o processo infeccioso. Os nematoides-das-galhas, polífago e amplamente disperso, injeta na célula hospedeira efetores que irão atuar em diferentes níveis no sistema imune vegetal, impedindo que as respostas de defesa sejam ativadas. O objetivo deste estudo foi caracterizar a resposta do transcritoma radicular no genótipo G075 de Musa acuminata tolerante à seca durante as respostas à seca, infecção por M. incognita e durante estresses cruzados abiótico e biótico combinados; além disso, após identificar genes possivelmente efetores relevantes ao parasitismo de M. incognita, estes foram validados por meio da tecnologia de RNA interferente em plantas de tabaco transgênicas. Amostras de RNA total de raízes foram extraídas de G-075 21 dias após somente inoculação com juvenis J2 de M. incognita, após déficit hídrico, após estresse biótico e abiótico combinados, ou controle não estressado. As bibliotecas de cDNA foram sequenciadas em pares usando a tecnologia lllumina NovaSeq 6000 S4. Sequências de alta qualidade foram mapeadas contra o genoma referência M. acuminata ssp. malaccensis var. Pahang (versão 4), com genes diferencialmente expressos (DEGs) identificados e classificados de acordo com o enriquecimento da ontologia gênica. A análise fisiológica da condutância estomática confirmou respostas ao estresse hídrico no genótipo tolerante 14 dias após a retirada da água. De 34.317 transcritos de genes mapeados para modelos de genes no genoma de referência de Musa, um total de 5.090 DEGs foram identificados em todos os tratamentos. Destes, 573 genes diferencialmente expressos (DEGs) foram identificados em bibliotecas infectadas com nematoide em relação ao controle não inoculado. A análise de enriquecimento revelou termos GO superrepresentados relacionados à atividade catalítica, atividade oxidorredutase, ligação a carboidratos e ligação a ácidos nucleicos. Um total de 2.834 DEGs potencialmente envolvidos em estresse hídrico foram identificados, com termos GO super-representados compreendendo resposta ao estímulo, atividade catalítica e ligação a ácidos nucleicos. Para o estresse cruzado, foram identificados 1.683 DEGs responsivos, dentro das categorias de GO enriquecidas de resposta a estímulo, atividade catalítica, atividade de oxidorredutase e ligação a ácidos nucleicos. Por outro lado, a partir de análises de bioinformática de transcritoma obtido de raízes de tomateiro infectado por M. incognita, 20 sequências gênicas foram selecionadas e tiveram a expressão validada via RT-qPCR. Destes, 6 genes foram selecionados e vetores de RNAi host delivered foram desenhados utilizando-se de parte de suas sequências. Os vetores foram inseridos em explantes de tabaco via agroinfiltração, e eventos transgênicos obtidos na geração T1, foram confrontados em bioensaio de inoculação com juvenis J2 de M. incognita, avaliados 60 dias após inoculação. Apenas um de três eventos transgênicos pertencentes à construção gênica 21700 obteve diferença significativa para fator de reprodução, número de ovos por grama de raiz e peso de raiz, quando comparado ao controle não transformado. A análise do transcritoma radicular do genótipo G-075 tolerante ao estresse hídrico, fornece uma maior compreensão da complexa regulação das respostas do hospedeiro que ocorrem durante o estresse hídrico, o estresse biótico e durante os estresses combinados. Os genes candidatos são apropriados para o desenvolvimento de estratégias de manejo de amplo espectro para esses múltiplos estresses com base no melhoramento genético de cultivares superiores. Ademais, identificar genes relevantes ao parasitismo do nematoide, principalmente na fase inicial da infecção, permite o uso de tecnologias como a interferência do RNA visando a obtenção de plantas tolerantes a uma ou mais espécies de fitonematoides.

Frutos não convencionais à agricultura brasileira, como Syzygium jambos (Myrtaceae) são amplamente estudados para uso medicinal, mas as doenças que deterioram esses frutos são negligenciadas. Os gêneros de fungos das famílias Nectriaceae, Bionectriaceae e Botryosphaeriaceae causam doenças importantes em plantas de importância agrícola e florestal, mas raramente são relatados em espécies nativas e/ou causando podridão de frutos. A identificação desses fungos é desafiadora, especialmente o grupo Calonectria-like (Nectriaceae) por englobar fungos relacionados filogeneticamente e morfologicamente ao gênero Calonectria. Desde 1995, a submissão de sequências de diferentes regiões genômicas foi consolidado no GenBank para o reconhecimento das espécies filogenéticas. Essa regra facilitou a identificação de espécies, mas a falta de uniformidade e o número crescente de dados dificulta ou impossibilita os estudos de gama de hospedeiros e distribuição geográfica. Portanto, esse estudo teve o objetivo de realizar uma meta-análise das informações disponíveis no GenBank para os fungos do complexo Calonectria-like e identificar morfo-molecularmente os isolados de Calonectria-like, Clonostachys, Cylindrocladiella, Gliocephalotrichum, Gliocladiopsis e Neofusicoccum obtidos a partir de frutos coletados no Distrito Federal, Goiás, Minas Gerais, Paraná, Pernambuco, Santa Catarina e São Paulo. A meta-análise revelou divergências entre as regiões genômicas depositadas para cada isolado, sendo que as sequências da região fator de elongação (n=5.125) e beta-tubulina (n=5.287) são mais representativas em relação a calmodulina, histona, RNA Polimerase 2, espaçador interno transcrito, e a subunidade maior do ribossomo (28S rDNA). O intercâmbio de amostras entre os grupos de pesquisa proporcionou o “Efeito Matryoshka” evidenciado pela super-representação de isolados. A análise revela que 78,3% das sequências analisadas possuem informações sobre o local de coleta enquanto apenas 12% possuem informações sobre o substrato/hospedeiro. Enquanto a maioria dos gêneros possuem uma distribuição geográfica abrangente, os gêneros Curvicladiella e Xenocylindrocladium são restritos à América do Sul e Ásia, respectivamente, sendo que a maioria das espécies são encontradas no Brasil (90%) e na China (100%), respectivamente. Os 86 isolados identificados morfo-molecularmente pertencem aos gêneros Calonectria (n=15), Clonostachys (n=8), Cylindrocladiella (n=28), Gliocladiopsis (n=18), Gliocephalotrichum (n=2) e Neofusicoccum (n=15). Desse total, sete espécies conhecidas foram documentadas enquanto uma, duas e três espécies novas serão propostas para os gêneros Clonostachys, Calonectria e Cylindrocladiella, respectivamente. As espécies Cylindrocladiella vitis, Gliocladiopsis hennebertii e Neofusicoccum occulatum e N. umdonicola são relatadas pela primeira vez no Brasil enquanto novas combinações de hospedeiras foram registradas para C. pseudocholeuca, C. rogersoniana, Cy. infestans, Cy. lageniformis, Cy. peruviana, Gliocephalotrichum simplex, Gliocladiopsis tenuis, N. batangarum, e N. parvum em frutos de Dypsis madagascariensis, Eugenia aggregata, Eugenia involucrata, Euterpe edulis, Spondias mombin, Syzygium jambos e Terminalia catappa. Esse estudo demonstra a necessidade de levantamentos abrangentes sobre a diversidade de espécies fúngicas em plantas nativas e alerta sobre o risco de transmissão para as plantas de interesse econômico.

A fotossíntese, a condutância estomática e a transpiração são atividades fisiológicas de plantas que influenciam no potencial produtivo das culturas. A interferência dos nematoides das galhas na fisiologia da planta ainda é pouco estudada, assim como a capacidade de rizobactérias amenizar os danos fisiológicos na planta causados por nematoides. A ausência de métodos de controle alternativos ao nematoide Meloidogyne enterolobii dificultam o manejo eficiente e sustentável ao meio ambiente. Os objetivos desta pesquisa foram avaliar in vitro o efeito de um bionematicida, de ingrediente ativo Bacillus methylotrophicus sobre os ovos e juvenis de M. enterolobii e monitorar ao longo do tempo alterações na fisiologia de goiabeira inoculadas com M. enterolobii e tratadas com o bionematicida. Foram realizados experimentos in vitro sobre ovos e juvenis de M. enterolobii. Os tratamentos foram representados pelas concentrações de 1%, 10%, 25%, 50% e 70% do bionematicida, tendo o tratamento com água como controle. Foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado com seis repetições e duas repetições no tempo. Os tratamentos com ovos foram avaliados aos 2, 4, 6, 8 e 10 dias após a incubação, através da contagem do número de ovos danificados. Os tratamentos com juvenis foram avaliados em intervalos de 24 até 96 horas pela contagem do número de juvenis mortos. O monitoramento da atividade fisiologia da goiabeira foi avaliado em casa de vegetação e em campo e os tratamentos representados por: 1) goiabeira `Pedro Sato´ não inoculada e não tratada com B. met (controle); 2) goiabeira `Paluma´ não inoculada e não tratada com B. met (controle); 3) `Pedro Sato´ não inoculada e tratada com B. met; 4) `Paluma´ não inoculada e tratada com B. met; 5) `Paluma´ inoculada e não tratada com B. met; 6) `Pedro Sato´ inoculada e não tratada com B. met; 7) `Pedro Sato´ inoculada e tratada com B. met e 8) `Paluma´ inoculada e tratada com B.met. Os tratamentos foram dispostos em DIC e DBC, em casa de vegetação e no campo, respectivamente. Foram realizadas quatro aplicações do bionematicida, nas dosagens de 3 mL/L de água por planta em casa de vegetação e 1 mL/L de água por planta no campo. Entre a segunda e a terceira aplicação as plantas foram inoculadas com 5000 ovos e eventuais juvenis de M. enterolobii em casa de vegetação e 6000 ovos e eventuais juvenis de M. enterolobii no campo. Em casa de vegetação foram realizadas sete avaliações dos parâmetros fisiológicos das goiabeiras (condutância estomática, eficiência no uso da água, fotossíntese e transpiração) e seis avaliações do teor de clorofila total ao longo do ciclo de desenvolvimento da goiabeira. Aos 132 dias após a inoculação (DAI) as raízes foram pesadas e determinado o índice de galhas, índice de massas de ovos e o fator de reprodução. Em campo, foram realizadas 10 avaliações dos parâmetros fisiológicos das goiabeiras (condutância estomática, eficiência no uso da água, eficiência de carboxilação, fotossíntese e transpiração) e foi estimada a produtividade através da colheita e posterior pesagem dos frutos. In vitro os danos aos ovos foram crescentes para todos os tratamentos, não havendo diferença entre as dosagens após seis dias de exposição. A mortalidade de J2 aumentou até as 48 horas nas dosagens mais baixas (1%, 10% e 25%), tendo permanecido próxima dos 100% nas dosagens mais altas (50% e 70%), e não houve diferença entre as dosagens após 48 horas de exposição. Em casa de vegetação, as alterações nos parâmetros fisiológicos concentraram-se nos primeiros 44 DAI. Meloidogyne enterolobii e B. met combinados reduziram a condutância estomática e a transpiração aos 26 e 44 DAI, respectivamente. A fotossíntese foi menor aos 26 DAI nos tratamentos que receberam o nematoide e a bactéria em combinação. Meloidogyne enterolobii e B. met isolados e combinados apresentaram redução na eficiência no uso da água aos 26 e 44 DAI. Índice de galhas, índice de massas de ovos e fator de reprodução foram maiores nos tratamentos que receberam o nematoide. No campo, para todos os tratamentos não houve diferença ao longo do tempo para as variáveis fisiológicas e não houve padrão nas alterações ocasionados por M. enterolobii e B.met isolados e combinados. Meloidogyne enterolobii reduziu a condutância estomática em oito avaliações, a eficiência no uso da água e a fotossíntese em três avaliações e a transpiração em sete avaliações. O único aumento condicionado pelo nematoide foi observado na eficiência no uso da água aos 369 DAI. Bacillus methylotrophicus reduziu a fotossíntese aos 421 DAI, porém aumentou a fotossíntese aos 527 DAI, aos 318 e 369 DAI houve aumento na eficiência no uso da água. Meloidogyne enterolobii e B. met combinados reduziram a condutância estomática em 8 avaliações e a transpiração em 4 avaliações. Na eficiência de uso da água e na fotossíntese foi observada redução aos 421 DAI. Meloidogyne enterolobii e B. met combinados aumentaram a eficiência de uso da água aos 369 DAI a eficiência de carboxilação aos 224 e 465 DAI. A aplicação de B. met não atenuou os efeitos negativos de M. enterolobii sobre a atividade fisiológica da goiabeira e M. enterolobii e B. met isolados e combinados não alteraram a produtividade das goiabeiras. Bacillus methylotrophicus provocou danos aos ovos e causou a mortalidade dos J2 de M. enterolobii. Em condições controladas M. enterolobii e B. met combinados reduziram a condutância estomática, eficiência no uso da água, fotossíntese e transpiração das goiabeiras durante a fase inicial do desenvolvimento da frutífera. Meloidogyne enterolobii e B. met isolados reduziram a eficiência no uso da água aos 26 e 44 DAI. Os parâmetros nematológicos não foram influenciados pela bactéria. Em campo, é possivel que a ausência de alterações seja decorrente da influência de fatores ambientais, densidade de inóculos, modo de aplicação da bactéria e combinações das aplicações do nematoide e bactéria no tempo. Houve predomínio de redução nos parâmetros fisiológicos ocasionados pelo nematoide. A aplicação de B. met não atenuou os efeitos negativos do nematoide sobre a atividade fisiológica da goiabeira. Meloidogyne enterolobii e B. met isolados e combinados não alteraram a produtividade das goiabeiras.

A cebola (Allium cepa L.) é uma importante hortaliça cultivada desde a antiguidade e distribuída mundialmente. É a terceira hortaliça mais cultivada, atrás somente da batata e do tomate. Desde 2018 houve um aumento na ocorrência de queima bacteriana em campos de cultivo de cebola nos estados de Goiás, Minas Gerais e Distrito Federal, ameaçando a qualidade e a produtividade da cebola no cerrado brasileiro. Foram coletadas amostras e os isolados bacterianos identificados como sendo Xanthomonas euvesicatoria pv. allii (Xea). Visando ampliar os conhecimentos sobre o patógeno, o objetivo desse trabalho foi estruturar uma nova coleção de isolados, identificar, caracterizar e desenvolver um novo protocolo de detecção por PCR para Xea. A coleção de isolados de 2021 teve seu gênero confirmado pelos primers XgumD F7/R7 e variabilidade pela técnica de marcador molecular BOX-PCR. Haplótipos foram selecionados para o sequenciamento de quatro regiões genômicas para análise de Multilocus sequence analysis (MLSA). Para o desenvolvimento de um protocolo de detecção, os seis genomas disponíveis no GenBank de Xea foram reanotados e então por genômica comparativa buscou-se genes presentes entre todos os isolados e ausentes para demais espécies e patovares. Para o desenho de primers, as sequências dos genes exclusivos foram usadas no software NEB LAMP Primer Design Tool. Os primers sintetizados foram avaliados quanto sua capacidade de amplificação dos isolados de Xea, sensibilidade e especificidade com microbiota isolada de folha de cebola. Todos os isolados foram identificados como sendo do gênero Xanthomonas e pelo BOX-PCR foi possível identificar a presença de quatro haplótipos além dos seis haplótipos da coleção original. Pela análise de MLSA foi visto o agrupamento dos novos isolados com os originais de 2018/2019, com elevados valores de probabilidade posterior, enquanto somente o isolado A-2021-01 agrupou em um clado mais distante com isolados da patovar alfalfae. Somente o par de primer 5038_ID9 foi capaz de amplificar todos os haplótipos somente com o fragmento esperado de 200 pb e sensibilidade de amplificação de concentrações superiores à 50 pg. Nenhum dos isolados de microbiota foi amplificado com este par de primer.

Meloidogyne enterolobii é uma espécie de nematoide emergente no Brasil. Esta espécie tem sido considerada uma das mais agressivas entre os nematoides-das-galhas e vem causando danos às hortaliças e outras culturas de importância econômica, inclusive na presença de resistência genética a outras espécies desse gênero. A resistência genética em plantas, sempre que disponível, é a forma mais eficiente e econômica de controle dos nematoides‑das‑galhas. Nesse sentido, a busca por fontes de resistência é de grande importância para o controle desse nematoide. Culturas de importância econômica, incluindo as leguminosas (pulses) ervilha (Pisum sativum L.), grão-de-bico (Cicer arietinum L.) e lentilha (Lens culinaris Medik.), além de hortaliças como pimenta (Capsicum spp.) e batata-doce (Ipomoea batatas (L.) Lam.), são drasticamente afetadas por Meloidogyne spp. Avaliou-se a reação a M. enterolobii em 14 genótipos de ervilha, 06 de grão-de-bico, 1 de lentilha, 27 de pimenta (Capsicum chinense), 07 de pimentão (C. annuum) e 08 de batata-doce. Todos os experimentos foram conduzidos em casa-devegetação, em delineamento inteiramente casualizado com 06 repetições e cada planta sendo inoculada com 5000 ovos e eventuais juvenis de segundo estádio (J2). Para reação de genótipos de pulses e de batata-doce a M. enterolobii, os experimentos foram repetidos duas vezes no tempo. Quanto à reação de pimentas, foram instalados dois experimentos, um para C. chinense e outro para C. annuum. Sessenta e cinco dias após a inoculação (DAI) das culturas de ervilha, grão-de-bico, lentilha e pimentas e aos 90 DAI para a batata-doce. Foram avaliadas as seguintes variáveis nematológicas: índice de galhas (IG), índice de massa de ovos (IMO), número de ovos por grama de raiz (NOGR) e fator de reprodução (FR). Nenhum dos genótipos de ervilha, grão-de-bico, lentilha e pimentas avaliados apresentaram resistência a M. enterolobii. Entretanto, 03 genótipos de batata-doce (BGBD 1399, MD 1609024 e MD 1610036) foram classificados como resistentes. Diante da importância e das perspectivas de expansão dessas culturas no Brasil, os resultados deste estudo contribuem significativamente para o conhecimento da sua reação de genótipos dessas culturas a essa espécie de nematoide, assim como identificam potenciais fontes de resistência para programas de melhoramento visando o desenvolvimento de cultivares e atendendo à necessidade contínua de pesquisas para seleção de genótipos com resistência a M. enterolobii.

A cana-de-açúcar (Saccharum spp.), espécie pertencente à família Poaceae, é a principal fonte de matéria-prima para a produção de açúcar e etanol combustível no Brasil, razão pela qual ocupa papel de destaque na economia do país. A cultura é acometida pela doença podridão abacaxi, causada por Thielaviopsis sp., fungo este que prejudica, principalmente, a brotação das gemas. O objetivo do presente trabalho foi avaliar in vitro e in vivo a eficiência de, inicialmente 15 linhagens de Trichoderma no controle dessa doença, além de uma linhagem comercial incluída como referência nos ensaios. Adotaram-se diferentes métodos de laboratório, como pareamento de culturas, exposição aos compostos orgânicos voláteis (COVs) em atmosfera compartilhada e exposição aos extratos brutos autoclavados do antagonista. Todas as linhagens de Trichoderma foram capazes de inibir o crescimento micelial de Thielaviopsis sp. Os demais ensaios realizados seguiram com as linhagens que apresentaram melhores desempenhos, sendo elas CEN281 (T. afroharzianum), CEN1277 (T. asperelloides), CEN1513 (T. koningiopsis), CEN1546 (T. afroharzianum) e CEN219 (T. harzianum) sendo essa a linhagem comercial. Abordouse também a inibição do crescimento micelial após a exposição aos COVs na cronologia, por ser este um dos principais mecanismos de ação dos fungos antagonistas. Os experimentos in vivo consistiram na inoculação do patógeno e antagonistas em toletes de cana “CTC20”. Verificou-se a redução da severidade da doença pelas linhagens de Trichoderma tanto em ensaios de laboratório, como em ensaios em casa de vegetação. Nestes últimos, avaliaram-se a altura de plantas, massa seca de raízes e parte aérea, diâmetro do colmo, além da severidade da doença. O principal momento de inibição do patógeno ocorreu após as 72 horas de crescimento do antagonista, para a maioria das linhagens no ensaio de COVs na cronologia. A severidade da doença foi reduzida em aproximadamente 70% por uma das linhagens selecionadas. Os ensaios conduzidos em casa de vegetação complementaram os anteriores, conduzidos in vitro e in vivo, comprovando a eficácia das linhagens estudadas no controle da podridão abacaxi em cana-de-açúcar. Infere-se, com base nos testes realizados, que o agente biocontrole pode ser utilizado, em tratamento dos toletes previamente ao plantio, como uma medida profilática para o controle da podridão abacaxi e, também, como um promotor de enraizamento para a cultura, inclusive na produção de mudas pré-brotadas (MPB). Em todos os ensaios realizados, uma linhagem da Coleção da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, identificada como pertencente à espécie T. asperelloides (CEN1277) apresentou destaque nos ensaios conduzidos, com resultados semelhante aos verificados com a linhagem comercial já registrada para controle da doença. Portanto, essa linhagem pode ser disponibilizada para o desenvolvimento de um novo produto, conforme demanda o mercado de fungicidas biológicos.