Banca de QUALIFICAÇÃO: Juliana Amorim dos Santos

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Juliana Amorim dos Santos
DATA : 29/09/2022
HORA: 14:00
LOCAL: Plataforma Teams
TÍTULO:

Modulação da via de sinalização PI3K-PTEN-AKT-mTOR no processo de reparo em modelos de mucosite oral

PALAVRAS-CHAVES:

Mucosite oral; via PI3K-PTEN-AKT-mTOR; modelo in vitro; reparo tecidual

PÁGINAS: 100
RESUMO:

INTRODUÇÃO: A mucosite oral (MO) é uma reação adversa prevalente em indivíduos sob terapia antineoplásica com necessidade de estratégias terapêuticas seguras e eficientes. Nesse contexto, os moduladores da via PI3K-PTEN-AKT-mTOR podem ser alternativas potenciais. OBJETIVO: Avaliar a modulação da via de sinalização PI3K-PTEN-AKTmTOR no processo de reparo em modelos de mucosite oral. METODOLOGIA E RESULTADOS PARCIAIS: Até o momento, 2 modelos in vitro foram estabelecidos. Para o primeiro, foram utilizadas monocultura de queratinócitos humanos imortalizados e cultura primária de fibroblastos gengivais humanos com três estímulos: lipopolissacarídeo de Escherichia coli (LPS), extrato proteico de Porphyromonas gingivalis (Pg) e radiação ionizante (IR). Para o segundo modelo, aplicaram-se os mesmos estímulos em co-culturas com insertos transwell para possibilitar a interação celular entre queratinócitos e fibroblastos pela secreção de mediadores químicos. Para avaliar os efeitos da modulação da via PI3KPTEN-AKT-mTOR, os modelos foram tratados com curcumina, BpV(pic) e fotobiomodulação. Até o momento, os efeitos foram avaliados por teste de viabilidade, análise morfológica, ensaio de cicatrização e migração celular. Para o estabelecimento do modelo de MO, os estímulos de maior citotoxicidade foram induzidos pela associação dos três componentes (LPS + Pg + IR), com resultado estatisticamente significante nos queratinócitos (p<0,001). Nos fibroblastos, embora tenha sido observada maior resistência aos estímulos, a combinação dos três estímulos é essencial para gerar agressão celular, quando comparada à radiação ionizante isolada (p<0,05) e ao estímulo bacteriano isolado (p<0,001). Na sequência, no primeiro modelo com monocultura, o tratamento com curcumina aumentou a viabilidade dos fibroblastos (p<0,01), o fechamento da lesão (p<0,05) e a área nuclear (p<0,005), e reduziu a área citoplasmática de queratinócitos (p<0,05). BpV(pic) aumentou a viabilidade dos fibroblastos (p<0,05), área nuclear (p<0,0001), fechamento da lesão (p<0,005) e expressão de vimentina. Em associação, reduziu a área citoplasmática de queratinócitos (p<0,001). A fotobiomodulação também foi capaz de aumentar a viabilidade celular tanto nos queratinócitos (p<0,05) quanto nos fibroblastos (p<0,05) e no fechamento da lesão apenas nos fibroblastos (p<0,05). Para o segundo modelo com co-cultura, os fibroblastos apresentaram melhor resposta do que os queratinócitos após os tratamentos. A fotobiomodulação acelerou o fechamento da lesão em fibroblastos (p<0,05). Entretanto, esse tratamento tendeu a reduzir o fechamento da lesão em queratinócitos após 48 horas. Assim, os tratamentos induziram a proliferação celular e o processo de reparo nos modelos de mucosite oral in vitro, principalmente em fibroblastos. Os queratinócitos parecem ser mais suscetíveis à agressão e menos responsivos aos tratamentos apresentando também uma resposta mais heterogênea. Os resultados destacam a importância de modelos bem estabelecidos para o estudo mais aprofundado da mucosite oral. Além disso, reforça a hipótese de que os moduladores da via PI3K-PTEN-AKT-mTOR podem ser tratamentos adjuvantes eficazes no manejo dessa lesão. PRÓXIMOS PASSOS: Dessa forma, para análise e confirmação da sinalização das vias de interesse, os próximos passos desse projeto preveem a realização de experimentos de expressão gênica por reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e expressão proteica por Western blot (PI3K, PTEN, AKT, mTOR, NFκB, TNFα, IL-6, IL-1β) nos modelos já estabelecidos, além do desenvolvimento de novos modelos de mucosite oral com cultura 3D e animal ex-vivo.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - CINTHIA GABRIEL MEIRELES - MS
Presidente - 1278451 - ELIETE NEVES DA SILVA GUERRA
Externo à Instituição - RICARDO DELLA COLETTA - UNICAMP
Interna - 768.449.191-15 - TAIA MARIA BERTO REZENDE - UFMG