Banca de DEFESA: Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de Souza

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Anna Fernanda Pinheiro de Vasconcellos Brum de Souza
DATA : 23/02/2024
HORA: 08:30
LOCAL: Auditório 4 – Instituto de Ciências Biológicas – Universidade de Brasília
TÍTULO:

Análises proteômica e fosfoproteômica de células Aag-2 de Aedes aegypti infectadas com os arbovírus MAYV e CHIKV

PALAVRAS-CHAVES:

arbovírus, Aedes aegypti, cultura de célula, espectrometria de massas, proteínas, fosforilação.

PÁGINAS: 151
RESUMO:

Mayaro virus (MAYV) e Chikungunya virus (CHIKV) são dois arbovírus pertencentes
ao gênero Alphavirus. Enquanto o MAYV é endêmico da América do Sul, o CHIKV já foi
responsável por epidemias nas Américas, na África, na Europa e na Ásia. O mosquito
Aedes aegypti tem a capacidade de transmitir ambos os vírus citados e o combate às
arboviroses focando apenas na erradicação do vetor tem se mostrado ineficaz a longo
prazo. Além disso, o uso de inseticidas levou ao desenvolvimento de resistência a
compostos como temefós, deltametrina e DDT nessa espécie de mosquito. Assim, a
necessidade de desenvolvimento de estratégias alternativas de controle desses vírus

levou ao aumento expressivo da quantidade de estudos focados na interação vírus-
vetor, muitos deles analisando aspectos moleculares, como as proteínas envolvidas

nessa interação. Neste sentido, o presente estudo aborda a análise proteômica de
células Aag-2 de Ae. aegypti infectadas com CHIKV em multiplicidade de infecção (MOI)
0,1 e tempos de coleta t = 0 h, 12 horas pós-infecção (hpi) e 48 hpi. As amostras, em
triplicatas biológicas, foram processadas para espectrometria de massas por redução

com DTT (Roche), alquilação com iodoacetamida (Sigma-Aldrich) e digestão com tripsina
(Promega). Entre outros resultados, foi observada uma maior abundância de proteínas
relacionadas à tradução em 12 hpi, enquanto proteínas relacionadas à produção de
energia, em 48 hpi. As imagens de microscopia eletrônica de transmissão revelaram,
além de muitas partículas virais, mitocôndrias com formato alongado em 48 hpi. Isso
também pode ser consequência da infecção viral, pois, ao provocar um desbalanço da
rede mitocondrial, pode-se levar a uma maior expressão de componentes produtores
de energia. Ademais, sabe-se que a fosforilação de proteínas está altamente relacionada
à regulação espaçotemporal de diversos processos essenciais ao funcionamento dos
organismos. Como os vírus sequestram a maquinaria celular do hospedeiro para sua
própria replicação, espera-se encontrar uma modulação diferencial no padrão de
fosforilação nas células infectadas. Assim, também objetiva-se realizar uma análise
fosfoproteômica de células Aag-2 infectadas com MAYV e CHIKV no presente trabalho.
Foi realizada uma predição in silico de fosfoproteínas de Ae. aegypti e as 435 proteínas
resultantes foram enriquecidas para processos como autofagia e via de sinalização
MAPK. Para as análises experimentais, foram utilizados o MOI 1 e os tempos de coleta t
= 0 h, 2 hpi, 4 hpi, 8 hpi e 12 hpi, em quadruplicatas biológicas. As proteínas extraídas a
partir das células Aag-2 foram utilizadas para Western Blot e espectrometria de massas.
Os ensaios de Western Blot contra anticorpos anti-fosfoserina, fosfotirosina e
fosfotreonina (Sigma-Aldrich) apresentaram diferentes padrões de marcação para cada
anticorpo. A partir do processamento do extrato total de proteínas para a
espectrometria de massas e dessalinização, foi realizado o enriquecimento de
fosfopeptídeos por colunas de dióxido de titânio (TiO2) (Thermo Fisher). Após a
obtenção dos dados da análise por espectrometria de massas, a análise de
bioinformática nos permitirá verificar a influência da infecção por MAYV e CHIKV sobre
a homeostase das células hospedeiras de Ae. aegypti nas vias metabólicas que são
reguladas por eventos de fosforilação.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2594909 - SEBASTIEN OLIVIER CHARNEAU
Interno - 1316471 - DANIEL MENDES PEREIRA ARDISSON DE ARAUJO
Externa à Instituição - RAYANE NUNES LIMA - INCT -BIOSYN
Externa à Instituição - JULIANA ALVES PARENTE ROCHA - UFG
Externo à Instituição - Reynaldo Magalhães Melo - CNPEM